Obtención de anticuerpos específicos contra Helicobacter pylori producidos en yemas de huevos de gallina araucana.

Abstract

Helicobacter pylori es el agente causal de diversas patologías gastroduodenales, con una seroprevalencia a nivel mundial de 50% y en Chile de un 73-76%. La dificultad en el tratamiento actual (resistencia a los antibióticos, efectos secundarios y alto costo) hace necesaria la búsqueda de métodos de tratamiento más eficientes e idealmente de prevención, como el planteado en este estudio. El diseño experimental contempló la inoculación intramuscular de gallinas araucanas con lisados completos de dos cepas de H. pylori con diferente genotipo de virulencia: la cepa ATCC 43504 (cagA+, vacAs1m1, dupA-), asociada al desarrollo de cáncer gástrico y la cepa J99 (ATCC 70824) (cagA+, vacAs1m1, dupA+), asociada al desarrollo de úlcera duodenal. Se realizó el aislamiento de IgY desde la yema de los huevos recolectados, basado principalmente en ultrafiltración y precipitación con sulfato de amonio, obteniendo así anticuerpos aviares sin purificar (en bruto). Mediante cromatografía de adsorción tiofílica (TAC) se purificaron las IgY anti-H. pylori de las cepas J99 y 43504, obteniendo así las fracciones eluato II (peak II) y eluato III (peak III). El rango de concentración proteica de estas inmunoglobulinas fue de 0,3 a 5,4 mg/mL. Mediante electroforesis en geles de poliacrilamida en ambiente reductor (SDS-PAGE) y western blot (WB) se observó una banda de 67 KDa (cadena pesada de IgY) de las inmunoglobulinas de ambas cepas. El título de anticuerpos, mediante ELISA indirecto (ELISA-I), para IgY anti-H. pylori cepas J99 y 43504 fue mayor a 1/6400. En el test de reacción cruzada entre los anticuerpos aviares con diversas bacterias no hubo reacción cruzada. En los ensayos profilácticos y terapéuticos in vitro utilizando una línea celular de adenocarcinoma gástrico (AGS), el eluato III de IgY anti-H. pylori al ser desafiada con H. pyloridemostró una alta eficiencia protectora contra ambas cepas de H. pylori.