Functional and structural analysis of Andes virus L protein N-terminal domain, a potential pharmacological target Análisis funcional y estructural del dominio N-terminal de la proteína L de Andes virus , una potencial diana farmacológica.

Abstract

Andes virus (ANDV) es el principal agente etiológico del síndrome cardiopulmonar causado por hantavirus en Sudamérica. Al igual que otros virus con genomas segmentados de ARN monocatenario, ANDV inicia la síntesis de su ARNm usando caperuzas derivadas de los ARNm de la célula huésped. El motivo nucleasa PD…(E/D)…K presente en el extremo amino terminal de la proteína L, una de las cuatro proteínas codificadas por el genoma viral, se cree que actúa en el mecanismo de “cap-snatching”. Sin embargo, además de la completa ausencia de similitud de secuencia con otras endonucleasas identificadas anteriormente no existe evidencia experimental de una enzima funcional en esta región de la larga proteína. Con el objetivo de estudiar la función y estructura del dominio N-terminal de la proteína L de ANDV y dada la toxicidad de la proteína de tipo silvestre en bacterias, se produjeron mutantes y éstas se evaluaron bioquímicamente. Se mostró que los primeros 200 aminoácidos exhiben una actividad endoribonucleasa dependiente de Mn2+. Dicha actividad no requirió de caperuzas ni de secuencias específicas. Adicionalmente, este trabajo resolvió a una resolución de 2.4Å la primera disposición tridimensional de átomos para un dominio endonucleasa de hantavirus. La estructura reveló una conformación proteica conservada evolutivamente con distintivos parches cargados positivamente rodeando el sitio activo. Como prueba de concepto, para exponer la utilidad de las mutantes con actividad catalítica en futuras pesquisas de antivirales, empleando un inhibidor típico de “cap-snatching” endonucleasas se demostró una reducción dosis-dependiente de la actividad enzimática in vitro. De esta forma el siguiente estudio caracterizó funcional y estructuralmente una atractiva diana farmacológica y propone herramientas que permitirán el desarrollo de estrategias terapéuticas contra infecciones por hantavirus.