Función de los Factores de Transcripción CREB y C/EBPβ en la Actividad Transcripcional del Promotor de RIC8B humano.

Abstract

RIC8B es una proteína con actividad GEF y chaperona para las subunidades estimulantes (Gsα/Golfα) de las proteínas G heterotriméricas, modulando temporalmente la vía de señalización dependiente de cAMP. La expresión de RIC8B tejido específico así como dependiente del estadio del desarrollo podría explicar en parte los efectos pleiotrópicos de esta vía de señalización presente de manera ubicua en el organismo. Esta expresión restringida del gen RIC8B puede estar definida por la presencia de elementos de respuesta específicos en su región promotora. Análisis bioinformáticos de esta región permitieron la identificación de elementos de respuesta putativos para los factores de transcripción con dominio básico y cierre de leucina, CREB y C/EBPβ, altamente conservados en mamíferos. Estudios posteriores demostraron que la unión de C/EBPβ al promotor de RIC8B de ratón conduce a una disminución en la expresión de este gen durante la diferenciación de una línea osteoblástica, debido al reclutamiento de complejos remodeladores de cromatina de la familia SWI/SNF. Además, estudios previos de nuestro laboratorio han determinado que la actividad del promotor de RIC8B humano responde de manera negativa a aumentos en los niveles de cAMP. Sin embargo, la participación de CREB y de los elementos CRE en la actividad transcripcional del promotor de RIC8B aún no ha sido dilucidada. Con estos antecedentes decidimos determinar si la actividad del promotor del gen RIC8B humano es regulada por la acción de los factores de transcripción CREB y C/EBPβ. Nuestros resultados mostraron que tanto CREB1 como C/EBPβ se unen a secuencias del promotor del gen RIC8B humano en ensayos de unión in vitro y en ensayos en un contexto celular, debido a la presencia de elementos de unión específicos para cada factor de transcripción, distribuidos en dos regiones: una región proximal que contiene dos elementos CRE y una región distal que contiene 3 sitios C/EBP. Observamos además que la sobreexpresión de la subunidad catalítica de la quinasa PKA, en células HEK293T, genera una disminución de la actividad del promotor de RIC8B reflejado en una disminución en los niveles del RNA mensajero. Esta reducción en la actividad transcripcional del gen se asocia a una baja ocupancia de C/EBPβ y CREB1 en el promotor. Por otra parte, en células de neuroblastoma humano SH-SY5Y indiferenciadas sólo detectamos la unión de CREB1 al promotor. En esta condición el promotor se encontraría transcripcionalmente activo, ya que la inducción de la diferenciación al fenotipo neuronal produce una disminución en los niveles del mensajero. En su conjunto nuestros resultados muestran que los elementos CRE y C/EBP presentes en las regiones proximal y distal controlan la actividad del promotor y sugieren roles comunes y diferenciales para CREB1 y C/EBPβ en la regulación transcripcional del gen RIC8B humano.