Inhibición del crecimiento en modelos celulares de cáncer de próstata mediante la administración de vectores adeno-asociados que transducen shARN-OLR-1.

Abstract

La identificación de nuevos blancos moleculares y la búsqueda de nuevas estrategias terapéuticas para el tratamiento de cáncer de próstata (CaP) son un desafío en la actualidad. Estudios recientes mostraron la expresión de LOX-1 en células de CaP y en adenocarcinomas prostáticos humanos de estadios clínicos patológicos caracterizados por la invasión local y la generación de metástasis. Resultados previos de nuestro grupo demostraron que el receptor para la lipoproteína de baja densidad oxidadada, LOX-1, participa activamente en la angiogénesis y la transición epitelio-mesenquimal, estos procesos están asociados a la progresión tumoral en modelos celulares de CaP. Como hipótesis de trabajo planteamos que la transducción de shARNs dirigidos contra el receptor LOX-1, mediante el empleo de vectores adeno-asociados, reduce la tasa de crecimiento en modelo celular de cáncer de próstata. Para aceptar o rechazar esta hipótesis se propuso como objetivo, evaluar in vitro e in vivo el efecto en la reducción del crecimiento tumoral de células de CaP transducidas con vectores adeno-asociados que median la expresión de ARN de silenciamiento contra el gen codificante para el receptor LOX-1. Para transformar genéticamente la línea celular de CaP se sub-clonó una secuencia que codifican un short hairpin ARN (shARN) contra el gen del receptor LOX- 1 (gen OLR-1), en un plásmido recombinante para generación de vectores adenoasociados, que incluyen la secuencia para expresar una proteína fluorescente infrarroja. En esta tesis se demostró que el uso de vectores adeno-asociados es efectivo para transformar establemente la línea celular de CaP C4-2B. Los resultados in vitro mostraron que el silenciamiento parcial del gen OLR-1 en células C4-2B, disminuye la expresión de LOX-1 a nivel de ARN mensajero y proteína. Además, se disminuye la expresión de marcadores pro-angiogénicos como VEGF, marcadores asociados a procesos migratorios y de invasión: MMP-2 y MMP-9 y se previene el proceso de transición epitelio mesenquimal. Adicionalmente, en los ensayos in vivo utilizando xenografts de células C4-2B con expresión y silenciamiento del receptor LOX-1 en un modelo murino inmuno-deficiente, muestran que la línea celular C4- 2B/IRF682/shARN_OLR-1, presenta una menor tasa de crecimiento tumoral, en comparación con la línea C4-2B control. En conclusión, el uso de vectores adeno-asociados recombinantes que expresan shARN contra el gen OLR-1 resulta una posible estrategia terapéutica para reducir la tasa de crecimiento tumoral en cáncer de próstata.