Las regiones de quiebre cromosomal localizadas en el locus del gen RUNX1 presentan módulos cis reguladores activos.

Abstract

RUNX1 es un factor de transcripción esencial en el desarrollo de la hematopoyesis y blanco frecuente de translocaciones cromosómicas asociadas al desarrollo de leucemias. A la fecha, el gen RUNX1 ha sido identificado en alrededor de 65 translocaciones distintas, donde las más frecuentes son las translocaciones cromosómicas 8;21, 12;21 y 3;21. En estas translocaciones, el gen RUNX1 recombina con los genes ETO, EVI y TEL, respectivamente, en regiones específicas de su locus. Si bien los mecanismos responsables de estos eventos recombinantes son desconocidos, al estudiar los sitios de quiebre mapeados para el gen RUNX1 se han identificado algunas características comunes: a).- se localizan en regiones acotadas de los intrones, b).- algunas de ellas presentan elementos estructurales de la cromatina como sitios de Hipersensibilidad a Dnasa I, c).- presentan patrones específicos de modificaciones de histonas, d).- Colocalizan o se encuentran próximas a regiones de corte para Topoisomerasa II. Algunas de estas características (b, c y d) han sido asociadas a la presencia de módulos cis reguladores. Con el objetivo de identificar potenciales elementos cis reguladores transcripcionalmente activos en regiones de quiebre cromosomal descritas para el gen RUNX1, en esta tesis evaluamos el enriquecimiento de distintas marcas epigenéticas asociadas a módulos cis reguladores transcripcionalmente activos (H3K27ac, H3K4me1, H3K4me3, H2A.Z), a lo largo del locus del gen RUNX1. Nuestros resultados identificaron 4 módulos cis reguladores putativos localizados en las regiones de quiebre cromosomal de los intrones 1 y 5 del gen RUNX1. Para validar nuestros resultados se caracterizó mediante ensayos de reportero una de las regiones identificadas (ubicada en el sitio de quiebre del intrón 5 del gen RUNX1 y denominada región ERP) y evidenciamos que ERP modula la expresión de un gen reportero de luciferasa de manera orientación dependiente. Además, al evaluar la secuencia de ERP encontramos tres sitios de unión a proteínas RUNX. La unión de RUNX1 a estas secuencias se evaluó mediante ChIP, y se encontró que RUNX1 se asocia a la región ERP y forma parte de un complejo enzimático con la histona acetilasa p300. De hecho, al realizar cotransfecciones utilizando un vector de expresión para RUNX1 se evidenció que a altas concentraciones de RUNX1, este aumenta la expresión de un gen reportero con respecto a la actividad basal de la secuencia sin RUNX1. En conclusión, nuestros resultados demuestran que en una de las regiones de quiebre cromosomal descritas para el gen RUNX1 se localiza un elemento cis regulador que a su vez es controlado por el factor de transcripción RUNX1.