Transferencia de resistencia a antibióticos B-lactámicos desde cepas de klebsiella pneumoniae a otros bacilos gram negativos de origen hospitalario.

Abstract

Klebsiella pneumoniae ocupa el primer lugar entre los bacilos Gram negativos fermentadores multiresistentes aislados de infecciones hospitalarias en nuestro país. Ha sido, desde hace dos décadas, uno de los principales reservorios de genes que codifican -lactamasas derivadas de enzimas TEM y SHV, y en otros países de la región, de las enzimas CTX-M que, principalmente, le otorgan resistencia a cefalosporinas de tercera generación (C3G). Además, Klebsiella es un buen receptor de plásmidos de resistencia, por lo que este microorganismo parece contribuir a la diseminación de genes de resistencia. En esta tesis se evaluó la transferencia de resistencia a C3G y aztreonam mediante ensayos de conjugación, utilizando 30 cepas de K. pneumoniae de origen hospitalario como cepas dadoras y Escherichia coli K-12 (UC132) y 5 cepas de bacilos Gram negativos de familia Enterobacteriácea, aislados de muestras clínicas, como receptoras. Las cepas de bacilos Gram negativos empleados fueron: Citrobacter freundii (Cf1), Salmonella typhimurium (Sal21), Salmonella enteritidis (Sal53), Serratia marcescens (S25) y Escherichia coli (Ec151). Las 30 cepas de K. pneumoniae seleccionadas correspondieron a cepas aisladas entre los años 1997 y 2001 en distintos centros hospitalarios del país y desde diversas muestras clínicas. Un 50% de ellas provenía de muestras de tracto respiratorio (secreción bronquial y traqueal) y de orina. Además, presentaron la condición de resistencia a alguna C3G (cefotaxima, ceftazidima, cefoperazona, ceftriaxona) y aztreonam y ser productoras de -lactamasas de espectro extendido (BLEE). Para evaluar la trasferencia de resistencia a los antibióticos -lactámicos, en las cepas transconjugantes se determinó la concentración mínima inhibitoria (CMI) de C3G y aztreonam, la producción de BLEE y la presencia de genes que codifican para -lactamasas TEM, SHV y CTX-M.En los ensayos de transferencia de resistencia entre las cepas de K. pneumoniae y E. coli K-12, se obtuvo transferencia con 53.3% (16/30) de las cepas mediante conjugación en medio líquido. En las 14 cepas en que no se detectó transferencia se realizó conjugación en medio sólido y sólo en una cepa se detectó transferencia 2por este método. La mayor parte de las cepas transconjugantes adquirió resistencia a C3G y aztreonam, con un perfil de resistencia idéntico al de la correspondiente cepa dadora. Además, todas las transconjugantes fueron productoras de, al menos, una BLEE. En las 17 cepas de K. pneumoniae que conjugaron con E. coli K-12 se investigó la presencia de genes que codifican para enzimas de las familias TEM, SHV y CTX M, encontrándos simultáneamente los genes blaTEM y blaSHV en 76% (13/17) de las cepas y los genes blaTEM, blaSHV y blaCTX-M en 3 cepas. Los genes blaTEM y blaCTX-M fueron detectados en todas las transconjugantes al emplear E. coli K-12 como receptora, en cambio, en 5 de las transconjugantes no se detectó el gen blaSHV. Posteriormente, se seleccionó 5 de estas 17 cepas de K. pneumoniae para efectuar estudios de conjugación con cepas de bacilos Gram negativos aislados de muestras clínicas. Dos cepas portaban los genes blaTEM, blaSHV y blaCTX-M y 3 cepas los genes blaTEM y blaSHV. En todos los casos se detectó transferencia de resistencia a C3G y aztreonam y producción de BLEE en las cepastransconjugantes. Las cepas dadoras que portaban los 3 tipos de genes transfirieron sólo los genes blaTEM y blaCTX-M, en cambio las cepas dadoras que llevaban los genes blaTEM y blaSHV transfirieron ambos genes. Los resultados permiten confirmar la hipótesis de esta tesis, que plantea que cepas de K. pneumoniae de origen hospitalario productoras de -lactamasas codificadas por genes plasmídicos son capaces de transferir la resistencia a C3G y aztreonam a otros bacilos Gram negativos de origen hospitalario.