Clonamiento, expresión y caracterización funcional de Reductasas de Ácido Deshidroascórbico en Células HEK-293 = cloning, expression and functional characterization of dehydroascorbic acid reductase en HEK-293 cells.

Abstract

La vitamina C es un nutriente esencial para el normal funcionamiento de los sistemas fisiológicos, participa como antioxidante y cofactor enzimático. Puede encontrarse biológicamente activa en solución en la forma reducida (ácido ascórbico, AA) u oxidada (ácido deshidroascórbico, DHA). Las células de mamíferos son capaces de transportar el ácido ascórbico a través de cotransportadores de sodio ascorbato (SVCTs) y el ácido deshidrascórbico a través de transportadores facilitativos de glucosa (GLUTs). La vitamina C en el organismo se encuentra fundamentalmente en la forma reducida, dado a que el DHA que se genera en reacciones redox se reduce inmediatamente a ácido ascórbico intracelularmente, por un proceso de reciclaje y acumulación, con participación de DHA reductasas. Sin embargo, se desconoce el papel específico de cada una de las reductasas en la acumulación intracelular de elevadas concentraciones de ácido ascórbico. En esta dirección postulamos que las reductasas de ácidos deshidroascórbico glutaredoxinas y aldocetoreductasas son las responsables de la acumulación y reciclaje de la vitamina C. Para establecer este punto, nos hemos propuesto clonar DHA reductasas desde las células de origen humano; las enzimas aldoceto reductasa 1C3 (AKR1C3) la cual es NADPH dependiente, glutaredoxina 1 (Grx1) y glutaredoxina 2a (Grx2a) ambas dependientes del Glutatión. Una vez clonadas se construirán quimeras reductasa-proteína verde fluorescente para establecer su localización subcelular en células transfectadas, realizando ensayos y estudios de su papel en la acumulación, reciclaje y retención celular de vitamina C.