Comparación cuantitativa de técnicas de aclarado para la reconstrucción 3D de tejido hepático con resolución celular.

Abstract

Los órganos son unidades funcionales compuestas por distintos tipos de tejidos, los cuales se forman a través de agrupaciones de células que de manera coordinada toman configuraciones naturalmente tridimensionales (3D). Para lograr comprender de mejor forma estas estructuras, se utiliza microscopía volumétrica, la cual a su vez depende del nivel de transparencia de los tejidos, lograda a través de técnicas de aclaramiento óptico. Existe una gran variedad de técnicas de aclaramiento, todas tienen como objetivo homogeneizar los índices de refracción en los diferentes compartimientos celulares, pero difieren en cuanto a los niveles de compatibilidad con tinciones fluorescentes y a la deformidad que producen en los tejidos. En este trabajo buscamos implementar y comparar distintas técnicas de aclaramiento (SeeDB-SeeDB2G-RTF-FOCM-FRUIT) utilizando tejido hepático de ratón como modelo. SeeDB y FOCM produjeron las menores alteraciones morfométricas tanto a nivel macro como micrométrico. Mientras todos los aclaramientos mostraron compatibilidad con tinciones mediadas por anticuerpos, solo algunos tuvieron buen desempeño con moléculas fluorescentes pequeñas como el DAPI. Solo SeeDB mostró compatibilidad con todos los colorantes estudiados. La elección de la correcta técnica de aclaramiento tiene un impacto directo en la adquisición de imágenes por microscopía volumétrica y la generación de reconstrucciones 3D, facilitando así el entendimiento de tejidos como el hígado, el cual presenta una organización 3D compleja.