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http://repositorio.udec.cl/jspui/handle/11594/989
2024-03-28T11:48:56ZInnovaciones Analíticas en Sistemas Miniaturizados de Extracción para la Determinación de Drogas y Fármacos en Muestras Biológicas.
http://repositorio.udec.cl/jspui/handle/11594/10700
Título : Innovaciones Analíticas en Sistemas Miniaturizados de Extracción para la Determinación de Drogas y Fármacos en Muestras Biológicas.
Autor : Vejar Vivar, Carmina Beatriz
Resumen : La dificultad al trabajar sobre matrices biológicas y el surgimiento de nuevas drogas hacen de la toxicología un importante desafío analitico. La necesidad de reducir la complejidad y el impacto ambiental de los procesos químicos ha fomentado el desarrollo de estrategias analíticas más eficientes y sostenibles. En esta Tesis Doctoral se desarrollaron distintas estrategias de análisis para la detección de drogas en matrices forenses, dando énfasis, principalmente, a los procesos de preparación de muestra y su acoplamiento instrumental. El primer método fue desarrollado para el análisis de antidepresivos y benzodiazepinas mediante el acoplamiento directo de un dispositivo comercial de microextracción a un espectrómetro de masas de alta resolución, con lo que fue posible reducir los tiempos de análisis y el uso de solventes orgánicos. Otros dos métodos se enfocaron en establecer las capacidades extractivas de polidopamina. Este polímero se usó como material de recubrimiento de dispositivos de microextracción en el análisis de antidepresivos y drogas de abuso en saliva mediante espectrometría de masas, sin una separación cromatográfica previa. Por último, se desarrolló un método de alta sensibilidad mediante cromatografía líquida de ultra alta eficiencia acoplada a espectrometría de masas de alta resolución como método de “screening”. Su aplicación a muestras de sangre postmorten
provenientes del Servicio Médico Legal permitió la identificación de fármacos, drogas y metabolitos de distintos grupos farmacológicos. Estas estrategias permitieron el análisis eficiente, y relativamente sencillo, de drogas y fármacos en muestras biológicas con un enfoque más amigable con el medio ambiente.; The complexity of biological matrices and the constat appearance of new drugs make toxicology a major analytical challenge. The need to increase the simplicity of the procedures and to reduce the environmental impact of chemical processes have encouraged the development of more efficient and sustainable analytical strategies. In this PhD Thesis, different analytical strategies for the detection of drugs in forensic matrices were developed. The main emphasis was placed on sample preparation processes and their instrumental coupling. The first method was developed for the
analysis of antidepressants and benzodiazepines by direct coupling of a commercial microextraction device to a high-resolution mass spectrometer, thus reducing analysis times and the use of organic solvents. Two other methods focused on establishing the
extractive capabilities of polydopamine. This polymer was used as coating material for microextraction devices in the analysis of antidepressants and drugs of abuse in saliva by mass spectrometry, without a previous chromatographic separation. Finally, a highly sensitive method was developed using ultra-high efficiency liquid chromatography coupled to high resolution mass spectrometry as a screening method. Its application to
postmortem blood samples from the Forensic Medical Service of Chile allowed the identification of drugs and metabolites from different pharmacological groups. These strategies allowed the efficient and relatively simple, analysis of drugs and pharmaceuticals in biological samples with a more environmentally friendly approach.
Descripción : Tesis presentada para optar al grado académico de Doctor en Ciencias y Tecnología Analítica.2022-01-01T00:00:00ZImplementación de una plataforma analítica HPTLC-bioensayo-MS de efecto dirigido para la identificación de compuestos bioactivos en chirimoya (Annona cherimola Mill.).
http://repositorio.udec.cl/jspui/handle/11594/2240
Título : Implementación de una plataforma analítica HPTLC-bioensayo-MS de efecto dirigido para la identificación de compuestos bioactivos en chirimoya (Annona cherimola Mill.).
Autor : Galarce Bustos, Oscar Francisco
Resumen : El chirimoyo/a (Annona cherimola Mill.) es un árbol pequeño cultivado en diferentes países
incluido Chile. Este árbol produce un fruto conocido como chirimoya que ha sido largamente
utilizado en medicina tradicional. Algunas actividades biológicas beneficiosas para la salud
humana han sido demostradas mediante ensayos in vitro, sin embargo son pocos los
estudios que individualizan los compuestos que ejercen la bioactividad. El estudio de los
componentes bioactivos de la chirimoya permitiría descubrir moléculas con potencial
terapéutico para enfermedades crónicas no transmisibles, otorgando de esta manera un
valor agregado a la fruta y subproductos generados. Para la determinación de compuestos
bioactivos fue desarrollada e implementada una plataforma analítica HPTLC-bioensayo-MS
de efecto dirigido que permite la determinación e identificación in situ de compuestos
bioactivos mediante un flujo de trabajo simple y directo, que permite un screening general
de la composición de piel, pulpa y semilla de chirimoya. El uso de esta herramienta analítica,
permitió detectar en la piel de chirimoya tres compuestos con actividad inhibitoria sobre la
enzima acetilcolinesterasa, que luego fueron analizados mediante HPTLC-MS y UHPLCDAD-MS/MS. Los compuestos fueron identificados como anonaina, glaucina, y un tercer
candidato como xilopina, siendo por primera vez reportada la capacidad inhibitoria de estos
alcaloides. Aplicando el mismo sistema, tres fenolamidas presentes en piel y semilla fueron
detectadas e identificadas como inhibidores de a-glucosidasa, las cuales corresponden a
N-trans-feruloil tiramina, N-trans-p-coumaroil tiramina y N-trans-feruloil fenetilamina, siendo
primera vez que se reporta esta bioactividad así como la presencia de este último en
chirimoya. Los compuestos antioxidantes presentes en extracto de piel y semilla fueron
detectados vía ensayo HPTLC-DPPH, y la capacidad antioxidante fue cuantificada a partir
del mismo ensayo mediante procesamiento de imagen digital usando el software ImageJ.
Los compuestos que presentaron una mayor actividad, expresada como equivalentes de
ácido cafeico, fueron estudiados directamente mediante un análisis TLC-MS y clasificados
preliminarmente como como acetogeninas y fenolamidas. De esta manera, el ensayo
HPTLC-DPPH-MS resultó en una metodología completa que permite detectar, cuantificar e
identificar compuestos antioxidantes, estableciendo la aplicabilidad del procesamiento de
imagen digital sobre otras metodologías HPTLC-bioensayo.
El trabajo realizado logró establecer también un extracto de piel de chirimoya con destacada
actividad inhibitoria de AChE, a-glucosada y capacidad antioxidante, obtenido mediante una metodología optimizada de extracción por fluidos supercríticos. La presencia de
algunos de los compuestos, caracterizados en la plataforma analítica, fue cuantificada
mediante un análisis UHPLC-ESI-MS. Adicionalmente, hojas de diferentes variedades de
chirimoya fueron evaluados con la misma metodología, estableciendo su potencial como
fuente de alcaloides inhibidores de AChE. En resumen, la aplicación de la plataforma
analítica permitió evaluar el potencial de sub-productos de la agroindustrial, piel y semilla,
como fuente de compuestos bioactivos con potencial terapéutico.
Descripción : Tesis para optar al grado de Doctor en Ciencias y Tecnología Analítica.2019-01-01T00:00:00ZDesarrollo de una plataforma científica tecnológica para estudiar el proceso de clarificación de vinos orientada a disminuir la prevalencia de agentes clarificantes con potencial alergénico.
http://repositorio.udec.cl/jspui/handle/11594/990
Título : Desarrollo de una plataforma científica tecnológica para estudiar el proceso de clarificación de vinos orientada a disminuir la prevalencia de agentes clarificantes con potencial alergénico.
Autor : Pavón Pérez, Jessy
Resumen : La caseína y la ovoalbúmina son usadas habitualmente como agentes clarificantes durante
el proceso de elaboración del vino, con el objetivo de promover interacciones con
compuestos no deseados como algunos polifenoles y taninos. Este tipo de proteínas pueden
desencadenar reacciones alérgicas en individuos susceptibles, por tanto su presencia en
vinos puede ser un riesgo para la salud humana, especialmente cuando su presencia no está
reportada o indicada en la etiqueta. Es por esto que la Unión Europea estableció a través de
su Directiva 2003/89/EC, actualizada en el año 2012 Directiva 2012/579/EC que las
concentraciones mayores a 0.25 mg L-1 deben ser declaradas en la etiqueta. De ahí la
necesidad de contar con técnicas con un alto poder de resolución que proporcionen la
información necesaria para el análisis de estas proteínas en vino. En la presente tesis doctoral se demuestra el enorme poder que tiene la cromatografía líquida acoplada a la espectrometría de masa para la identificación y cuantificación de péptidos de caseína y ovoalbúmina en vinos. La extracción de las proteínas desde la matriz vino se realizó combinando el uso de membranas de ultracentrifugación y precipitación con solventes orgánicos. En particular el análisis se desarrolló a partir de la estrategia de trabajo
bottom-up. El paso limitante de esta metodología son los largos tiempos de digestión
enzimática que se requieren (12-24 horas). Debido a que varios factores (tiempo,
temperatura, relación concentración enzima:proteína, etc) pueden afectar el rendimiento de
la digestión tríptica la estrategia más eficiente es aplicar herramientas qumiométricas para
su optimización. Se empleó un Diseño Central Compuesto para optimizar la digestión con
tripsina aplicando una temperatura de 37oC y energías del infrarrojo, microondas y
ultrasonido. Cada método fue evaluado a partir de SDS-PAGE y del % de sequence
coverage (SQ) arrojado por la base de datos Mascot. En todos los casos fue posible
disminuir los tiempos de digestión y aumentar su rendimiento. Para la determinación de los péptidos resultantes fue desarrollado, implementado y validado un método UHPLC-DAD-ESI-MS/MS el cual en conjunto con la comparación de los resultados teóricos arrojados por las bases de datos Swiss-Prot y Mascot permitió la identificación y cuantificación de un péptido marcador para la -caseína, -caseína y la ovoalbúmina en 60 muestras comerciales de vinos chilenos, empleando como estándar interno un péptido marcado isotópicamente. De las muestras analizadas 17 presentaron concentraciones de estas proteínas en un valor cercano o superior a lo regulado por la OIV, por consiguiente se hace necesario establecer normativas que normalicen su uso en Chile. Con la finalidad de lograr una mayor identificación de péptidos marcadores de caseína y ovoalbúmina en los vinos se desarrolló un método UHPLC-ESI-Q/TOF, identificándose y cuantificándose 5 péptidos para -caseína, 4 para -caseína, uno para -caseína y 3 para ovoalbúmina. Esto evidencia las ventajas de emplear analizadores de masa híbridos de alta resolución en los análisis proteómicos. La separación e identificación de los péptidos marcadores en vinos se realizó también mediante HPTLC-ESI-MS. El uso de esta herramienta analítica, permitió detectar de manera rápida dos bandas características de la -caseína y ovoalbúmina. Explorando alternativas para reducir o evitar el uso de estos clarificantes se realizó un estudio químico-analítico utilizando bentonita, tierras de diatomea, caseína y ovoalbúmina.Se evaluó su influencia sobre el color, turbidez, antocianinas y polifenoles del vino. En aras de no añadir al vino agentes exógenos se evaluó también la capacidad de eliminar caseína y ovoalbúmina por una membrana de ultracentrifugación con flujo cruzado y tamaño de poro de 10kDa. En vinos tratados con estas proteínas no se encontraron péptidos característicos luego de ser sometidos al proceso de filtración.
Descripción : Tesis para optar al grado de doctor en Ciencias y Tecnología Analítica.2019-01-01T00:00:00Z