Estudio de prevalencia de ocratoxina A en vinos chilenos importancia toxicológica de los niveles detectados.

Abstract

El objetivo de este trabajo fue optimizar y validar un método por cromatografía liquida para cuantificar selectivamente Ocratoxina A en vinos previamente purificados con columnas C18. Las condiciones cromatográficas optimas fueron definidas utilizando un diseño central compuesto para tres factores relevantes: porcentaje de acetonitrilo en la fase móvil, flujo y temperatura de la columna. Las respuestas de 16 experimentos realizados se ajustan a un modelo polinomial de segundo orden, el cual se utilizo para predecir las condiciones optimas: fase móvil compuesta por acetonitrilo: agua: ácido acético (59.5:39.5:1.0 v/v/v), flujo de 1.2 ml min-1 y temperatura de columna de 30 ‹C. Con estas condiciones, se logro la efectiva separación y cuantificación de la micotoxina en menos de 5 minutos, usando una columna C18 YMC-Pack ODS-A (150 x 4.6 mm, S-5 ƒÊm) y detección por fluorescencia a las longitudes de onda de excitación y emisión de 333 nm 460 nm, respectivamente. La validación se realizo de acuerdo a la ICH guidelines. La calibración se ajusto a un modelo de regresión lineal en un rango 0.5 a 50 ng ml-1 con un coeficiente de determinación (R2) de 0.9992. La repetibilidad (desviación estándar relativa, RSD) y la precisión intermedia en matriz arrojaron valores de 1.3% (n=6) y 0.8% (n=3) respectivamente. Los limites de detección y cuantificación fueron 0.03 y 0.1 ng ml-1, respectivamente. Los estudios de recuperación en muestras sobrecargadas a cinco niveles de concentración se encontraron en el rango de 87.2 a 118.9% con un promedio de RSD de 7.4%. Adicionalmente, la exactitud también fue evaluada por comparación de metodologías. Los resultados obtenidos con el presente método fueron estadísticamente no diferentes (F-test, t-test) a los obtenidos con el método oficial de la Organización Internacional del Vino y la Vina (OIV). Por lo tanto, la metodología aquí propuesta es altamente útil y representa una buena alternativa para la determinación de ocratoxina A en vino bajo el límite máximo. residual.