Facultad de Farmacia
http://repositorio.udec.cl/jspui/handle/11594/72
2024-03-27T04:27:01ZAnálisis metabolómico en la caracterización de mecanismos de resistencia a agentes antineoplásicos en el cáncer de ovario y su uso para la identificación de potenciales blancos terapéuticos.
http://repositorio.udec.cl/jspui/handle/11594/11787
Análisis metabolómico en la caracterización de mecanismos de resistencia a agentes antineoplásicos en el cáncer de ovario y su uso para la identificación de potenciales blancos terapéuticos.
Alarcón Zapata, Pedro Felipe
La resistencia a la quimioterapia en el cáncer de ovario es un desafío significativo que complica la efectividad de los tratamientos farmacológicos. Esta tesis se centró en la evaluación de dos modelos celulares de cáncer de ovario con distintas respuestas a fármacos antineoplásicos, utilizando una estrategia analítica metabolómica basada cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas de alta resolución. Las células sensibles mostraron un predominio en el metabolismo glucosídico y aminoacídico, mientras que las células resistentes presentaron una sobrerregulación en el metabolismo lipídico y del glutatión. La inhibición farmacológica del glutatión en las células resistentes generó un cambio significativo en la resistencia a los agentes antineoplásicos, aumentó la eficacia farmacológica. Además, mediante análisis lipídico, observamos un aumento en el metabolismo lipídico exclusivamente en las células resistentes, no en las células sensibles, lo que podría contribuir al fenotipo de resistencia a la quimioresistencia. Aunque esta investigación se centró en modelos celulares, las conclusiones obtenidas ofrecen perspectivas prometedoras para la investigación traslacional y futuras aplicaciones clínicas. Los análisis metabolómicos podrían utilizarse para predecir la resistencia a los fármacos en pacientes, permitiendo un enfoque de tratamiento más personalizado. Además, identificar metabolitos como posibles blancos terapéuticos podría ayudar a contrarrestar la quimiorresistencia manipulando las vías metabólicas clave en el cáncer de ovario.; Chemotherapy resistance in ovarian cancer presents a significant challenge that complicates the efficacy of pharmacological treatments. This thesis focused on the evaluation of two cellular models of ovarian cancer with different responses to antineoplastic drugs, using an analytical metabolomic approach based on high-resolution liquid chromatography coupled with mass spectrometry.
Drug-sensitive cells exhibited a predominance in glycosidic and amino acid metabolism, while drug-resistant cells showed an overexpression in lipid and glutathione metabolism. The pharmacological depletion of glutathione in resistant cells generated a significant change in resistance to antineoplastic agents, with an increase in pharmacological efficacy. Additionally, through lipidomic analysis, we observed an increase in lipid metabolism exclusively in resistant cells, not in sensitive cells, which could contribute to the chemotherapy-resistant phenotype. Although this research focused on cellular models, the conclusions offer promising perspectives for translational research and future clinical applications. Metabolomic analyses could predict patient drug resistance, allowing for a more personalized treatment approach. Furthermore, identifying metabolites as potential therapeutic targets could help counteract chemotherapy resistance by manipulating critical metabolic pathways in ovarian cancer.
Tesis presentada para optar al grado de Doctor en Ciencias y Tecnología Analítica.
2023-01-01T00:00:00ZAnálisis del efecto de las quimioquinas CXCL9 y CXCL10 sobre la diferenciación in vitro de linfocitos B a células plasmáticas.
http://repositorio.udec.cl/jspui/handle/11594/11640
Análisis del efecto de las quimioquinas CXCL9 y CXCL10 sobre la diferenciación in vitro de linfocitos B a células plasmáticas.
Quiroga Sanzana, Romina Andrea
La investigación sobre la producción de anticuerpos durante la infección por SARS-CoV-2 ha revelado diferencias en los niveles de IgG dependiendo de la gravedad de los síntomas. En pacientes chilenos, se observaron altos niveles de IgG anti-SARS-CoV-2 en aquellos experimentaron una forma grave de la enfermedad, caracterizada por el síndrome de distrés respiratorio agudo severo y la presencia de secuelas pulmonares estructurales tras la infección por COVID-19. Además, se ha observado que las citoquinas y quimioquinas desempeñan un papel relevante en la infección. En particular, CXCL9 y CXCL10 están elevadas en pacientes severos en lo que se conoce como la "tormenta de citoquinas". Datos preliminares sugieren una correlación positiva entre los niveles circulantes de CXCL9 y CXCL10 y los niveles de IgG anti-SARS-CoV-2. Sin embargo, no está claro si estas quimioquinas podrían estar contribuyendo a la exacerbación de la respuesta de anticuerpos observada en estos pacientes. Es importante destacar que CXCL9 y CXCL10 también se han encontrado en muchas otras enfermedades inflamatorias, y se ha demostrado que su receptor (CXCR3) se expresa en linfocitos B y en linfocitos TCD4+ que desempeñan un papel en la respuesta de anticuerpos dependiente de células T. El objetivo general de este proyecto es analizar el efecto in vitro de las quimioquinas CXCL9 y CXCL10 sobre la respuesta inmune humoral en linfocitos B y T helper provenientes de individuos sanos. Se implementó un sistema de cultivo de tres fases optimizado para la diferenciación de los linfocitos B in vitro que se evaluó en ausencia y presencia de CXCL9 o CXCL10, al igual que la activación in vitro de linfocitos T helper. Los cambios fenotípicos en ambas poblaciones se analizaron mediante citometría de flujo, mientras que producción de anticuerpos IgG totales se evaluó al término de protocolo mediante ELISA. La activación de las células B se confirmó con la regulación positiva de CD86 y CD25, mientras que la diferenciación de las células plasmáticas se confirmó con la presencia de células CD38hiCD27hi y CD138+. La expresión de CXCR3 también se reguló positivamente con el cóctel de activación utilizado en la fase 1 y se mantuvo durante la fase 2 y 3. En cuanto a la expresión de CD86, solo CXCL9 aumentó la expresión de este marcador, mientras que la presencia de CXCL9 y CXCL10 aumentó significativamente el porcentaje de células CD38hiCD27hi, células CD138+ y secreción de IgG. Finalmente, dentro del contexto de la inducción del cambio de clase de la célula B, observamos que CXCL9 también aumentó la expresión de CD40L en las células TCD4+. En resumen, demostramos que CXCL9 y CXCL10 podrían ser claves en la modulación de la respuesta humoral. A futuro, sería interesante determinar qué rutas de señalización utilizan estas quimioquinas para producir dicho efecto.; Current investigations about antibody production during SARS-CoV-2 infection has revealed variations in IgG levels depending on severity. In Chilean patients, high levels of IgG antibodies against SARS-CoV-2 were observed in those who experienced a severe form of the disease, characterized by severe acute respiratory distress syndrome and the presence of lung sequelae following COVID-19 infection. Additionally, cytokines and chemokines have been found to play a significant role in the infection. Specifically, CXCL9 and CXCL10 are elevated in severe patients, a phenomenon known as the "cytokine storm." Preliminary data suggests a positive correlation between circulating levels of CXCL9 and CXCL10 and IgG antibodies against SARS-CoV-2. However, it remains unclear whether these chemokines may contribute to the exacerbation of the antibody response observed in these patients. CXCL9 and CXCL10 have also been detected in various other inflammatory diseases, and their receptor (CXCR3) have been shown to be expressed in B cells and CD4+ T helper cells involved in T cell-dependent antibody responses. The general aim of this project was to analyze the in vitro effect of CXCL9 and CXCL10 chemokines on the humoral immune response in B and T helper lymphocytes from healthy individuals. A three-phase culture system optimized for in vitro B cell differentiation was implemented and evaluated in the absence and presence of CXCL9 or CXCL10. In vitro activation of T helper lymphocytes was also assessed. Phenotypic changes in both cell populations were analyzed using flow cytometry, while the production of total IgG antibodies was assessed at the end of the protocol using ELISA. B cell activation was confirmed by the upregulation of CD86 and CD25, and the differentiation of plasma cells was confirmed by the presence of CD38hiCD27hi, and CD138+ cells. The expression of CXCR3 was also upregulated with the activation cocktail used in phase 1 and remained consistent during phases 2 and 3. Regarding CD86 expression, only CXCL9 increased its expression, whereas the presence of CXCL9 and CXCL10 significantly increased the percentage of CD38hiCD27hi cells, CD138+ cells, and IgG secretion. Finally, in the context of B cell class switch induction, it was observed that CXCL9 also increased CD40L expression in CD4+ T cells. In summary, this study demonstrated that CXCL9 and CXCL10 may play a crucial role in modulating the humoral response. In the future, it would be interesting to determine the signaling pathways through which these chemokines produce this effect.
Tesis presentada para optar al grado de Magíster en Bioquímica Clínica e Inmunología.
2023-01-01T00:00:00ZCaracterización química y biológica de extractos de hojas y fruto de calafate para la evaluación de su efecto sobre estrés oxidativo, y en modelo animal sometido a una pauta de ejercicio aeróbico.
http://repositorio.udec.cl/jspui/handle/11594/11522
Caracterización química y biológica de extractos de hojas y fruto de calafate para la evaluación de su efecto sobre estrés oxidativo, y en modelo animal sometido a una pauta de ejercicio aeróbico.
Nova Baza, Daniela Alejandra Gertrudris
El estrés oxidativo es un factor importante en el inicio de varias patologías, entre ellas enfermedades neurodegenerativas como Alzheimer y demencia senil; enfermedades cardiovasculares; cáncer entre otras. Diversos estudios indican que un estilo de vida que incluya una dieta rica en antioxidantes, ejercicio regular y vida social activa ayudarían a reducir o retardar los procesos celulares involucrados en el desarrollo de patologías asociadas al estrés oxidativo. En la búsqueda de alimentos funcionales, nuestro grupo de investigación ha estudiado un arbusto autóctono de la patagonia chileno argentina, el calafate (Berberis microphylla). El calafate posee una poderosa baya, consumida desde tiempos prehispánicos que posee altos niveles de compuestos bioactivos, especialmente compuestos fenólicos. El fruto es estacional, pero la planta es perenne, por lo cual las hojas se convierten en una interesante fuente de compuestos bioactivos para evaluar su potencial como alimento funcional. Se caracterizaron los compuestos polares y semipolares de los extractos metanólicos a través de HPLC-DAD-QTOF de cinco tipos de hojas de Berberis: Calafate (Berberis microphylla); Michay (Berberis darwinii); Calafatillo o Calafate enano (Berberis empetrifolia); Calafate o Michay (Berberis trigona); y Agracejo (Berberis vulgaris). Se lograron identificar en total 175 metabolitos diferentes entre los cinco extractos de hojas estudiadas. Además, se evaluó su potencial antioxidante y contenido de ácidos grasos. Posteriormente, se realizó una infusión acuosa con hojas de calafate, realizando una completa caracterización que implicó la cuantificación de los principales compuestos fenólicos presentes en la infusión, el contenido elemental, el efecto antioxidante de la infusión in vitro, su efecto sobre enzimas digestivas y sobre la viabilidad en modelos celulares, obteniendo resultados prometedores en Finalmente, en este trabajo de tesis se evaluó cómo la dieta y ejercicio impacta sobre el estrés oxidativo. Para esto se desarrolló en un modelo murino de estrés oxidativo, un plan de intervención que implicó una dieta suplementada con un extracto etanólico del fruto de calafate rico en compuestos (poli)fenólicos antioxidantes, el efecto del ejercicio aeróbico regular, además se evaluó el efecto sinérgico de ambas intervenciones. Finalizando la intervención, se analizaron muestras de plasma, cerebro e hipocampo de los animales, mediante UHPLC-QTOF-MS y se identificaron posibles biomarcadores de estrés oxidativo.
Tesis presentada para optar al grado de Doctor en Ciencias y Tecnología Analítica.
2023-01-01T00:00:00ZOptimización de una plataforma analítica para el aislamiento y carga de vesículas extracelulares pequeñas para el transporte de doxorrubicina.
http://repositorio.udec.cl/jspui/handle/11594/11511
Optimización de una plataforma analítica para el aislamiento y carga de vesículas extracelulares pequeñas para el transporte de doxorrubicina.
Contreras Moraga, Héctor Antonio
Las vesículas extracelulares (VEs) son pequeñas estructuras de origen celular. Participan en la comunicación intercelular y tienen gran un potencial como biomarcadores y para el transporte de moléculas. Sin embargo, los métodos de aislamiento y carga no están uniformemente establecidos. En esta tesis, se optimizaron las condiciones para purificar VEs pequeñas menores a 200 nm y cargarlas con Doxorrubicina. Se aplicó una metodología basada en ultrafiltración acoplada a cromatografía de exclusión por tamaño, y la carga por electroporación, mediante el Diseño de Experimentos (DoE). El método optimizado permitió aislar sobre un 70% de VEs entre 30-150 nm, siendo positivas para marcadores exosomales. Además, las fracciones de suero ricos en VEs exhibieron bajos niveles de Albúmina y Apo-B100. Durante la carga, el DoE reveló la importancia de la concentración inicial de la droga (DOX), demostrando la presencia de interacciones entre los factores que modifican su incorporación (DOXin). Además, se demostró que la agregación no sólo depende del campo eléctrico aplicado, sino también de la forma del pulso. En su conjunto, estos resultados sientan las bases de futuras investigaciones para lograr la carga efectiva y eficiente de moléculas en VEs.; Extracellular vesicles (EVs) are small cellular structures that play a pivotal role in intercellular communication and exhibit significant potential as biomarkers and drug delivery systems. However, methods for their isolation and loading are not uniformly established. In this thesis, conditions were optimized to purify small EVs smaller than 200 nm, and load them with Doxorubicin. We employed a methodology based on ultrafiltration coupled with size-exclusion chromatography, and loading by electroporation, using a Design of Experiments (DoE) approach. The optimized method enabled the isolation of over 70% of EVs in the 30-150 nm size range, which were positive for exosomal markers. Furthermore, serum pools rich in small EVs exhibited low levels of Albumin and Apo-B100 contamination. During the loading process, the DoE revealed the significance of the initial drug
concentration (DOX), demonstrating the presence of interactions among factors that modify its incorporation (DOXin). Additionally, it was demonstrated that EV aggregation is not solely dependent on the applied electric field but also on the pulse shape. Together, these results lay the foundation for future research endeavours aimed at achieving effective and efficient loading of molecules into EVs.
Tesis presentada para optar al grado de Doctor en Ciencias y Tecnología Analítica.
2023-01-01T00:00:00Z