Vías de señalización involucradas en el aumento de la síntesis de óxido nítrico por apolipoproteína A-l libre, vía el receptor ecto-F1-ATPasa.

Abstract

La disfunción endotelial es un evento temprano en el desarrollo de la enfermedad cardiovascular, y se caracteriza por una disminución en la síntesis y/o biodisponibilidad de óxido nítrico (NO). El NO es producido por la sintasa de NO endotelial (eNOS) y una disminución en la actividad de esta enzima conlleva un déficit en la respuesta vasodilatadora. Las lipoproteínas de alta densidad (HDL), conocidas por sus propiedades antiaterogénicas, favorecen la síntesis de NO, a través de interacciones entre su proteína mayoritaria, la apolipoproteína A-I (apoA-I), y receptores de superficie; sin embargo, existe escasa información del efecto de apoA-I, en su forma libre de lípidos, sobre la síntesis de NO. Resultados preliminares de nuestro laboratorio indican que apoA-I aumenta la fosforilación de la eNOS en S1177, lo que se asocia a una mayor respuesta vasodilatadora dependiente de endotelio. En células endoteliales, se ha descrito a ecto-F1-ATPasa como el mayor receptor de apoA-I libre, unión que aumenta la actividad hidrolasa de esta enzima (conversión de ATP a ADP). El ADP interacciona con receptores purinérgicos, lo que favorece la proliferación y sobrevida celular. Ensayos preliminares sugieren que apoA-I activa las vías de señalización Akt y ERK1/2, lo cual es revertido por IF1, un inhibidor de ecto-F1-ATPasa. El objetivo de esta tesis fue determinar si apoA-I aumenta la síntesis de NO a través de las vías de señalización PI3K/ Akt y ERK1/2, corriente abajo del receptor ecto-F1-ATPasa y de receptores purinérgicos expresados en el endotelio vascular (P2Y1 y/o P2Y12). Los resultados muestran que apoA-I aumenta significativamente la actividad de la eNOS, la biodisponibilidad de NO y la fosforilación de eNOS en S1177. Estos efectos son disminuidos significativamente con inhibidores de ecto-F1-ATPasa, mientras anticuerpos bloqueantes anti ABCA1 o SR-BI no modifican significativamente la síntesis de NO generada por apoA-I. La co-incubación de apoA-I con los inhibidores: wortmanina (PI3K), TGX-221 (PI3K), triciribine (Akt), U-0126 (ERK1/2) y MRS-2179 (P2Y1) bloquean el efecto de apoA-I en la síntesis de NO. Se concluye que apoA-I favorece la síntesis de NO, principalmente a través del receptor ecto-F1-ATPasa, el cual, mediante un aumento de ADP extracelular, activa el receptor P2Y1. Éste gatilla la vía PI3K (), la cual activa en forma paralela Akt y ERK1/2, las que fosforilan a la eNOS en S1177, aumentando su actividad enzimática y la síntesis de NO. Estos hallazgos, aportan al conocimiento de los efectos de apoA-I en el endotelio vascular y evidencian el rol central de ecto-F1-ATPasa en mecanismos que regulan la síntesis de NO.