Estudio de la regulación transcripcional del Gen RIC-8B durante la diferenciación celular.

Abstract

Actualmente, se conocen los mecanismos moleculares que están detrás del control transcripcional de muchos de estos genes. Sin embargo, para Ric-8, un gen que codifica para una proteína que ha sido ampliamente descrita por su rol en el control de la división celular asimétrica y simétrica en eucariontes, se desconocen tales mecanismos. De acuerdo con esto, el objetivo de esta tesis, es determinar los mecanismos moleculares de regulación transcripcional del gen Ric-8B durante la diferenciación celular. En ese contexto, mostraremos que la expresión de Ric-8B, un homólogo de Ric-8, es reprimida gradualmente durante la diferenciación celular osteoblástica en ratón. Además, mediante ensayos de actividad del gen reportero luciferasa, ARNs de interferencia, inmunoprecipitación de cromatina (ChIP) y ensayos de sensibilidad a endonucleasas, entre otras técnicas, demostraremos que la represión de la expresión de este gen durante la diferenciación osteoblástica, es mediada directamente por el factor de transcripción C/EBPβ. Coherentemente con lo anterior y con el hecho que el complejo remodelador de cromatina dependiente de ATP, SWI/SNF puede interactuar físicamente con C/EBPβ, y considerando además, que existen reportes que señalan que las dos subunidades catalíticas del complejo SWI/SNF (Brg1 y Brm), pueden modular negativamente la expresión génica, demostraremos que SWI/SNF reprime directamente la expresión de Ric-8B en células osteoblásticas diferenciadas, en forma dependiente de su actividad ATPasa. De acuerdo con esto, mostraremos también, que la represión de Ric-8B en células osteoblásticas diferenciadas está asociada a un incremento en la densidad nucleosomal y a un remodelamiento de la estructura de la cromatina, pero no a la metilación del ADN, ni a cambios en los niveles totales de acetilación de la Histona H3 en el promotor proximal de Ric-8B.