Resumen:
La eritropoyetina humana (hEPO) es la principal hormona encargada de
estimular la eritropoyesis. Su deficiencia causa anemia severa y ocurre en
pacientes con fallo renal debido a traumas, trasplantes, quimioterapia, diabetes
u otros. Para el tratamiento de estos pacientes es necesario el suministro externo
de la hormona. En la actualidad la eritropoyetina humana recombinante (rhEPO)
es producida en cultivo de células CHO, a pesar del alto costo, debido a que la
producida en otras células u organismos presenta glicosilaciones diferentes y por
tanto una actividad in vivo disminuida. Una alternativa podría ser utilizar rhEPO
sin glicosilaciones, sin embargo, esta variante posee una actividad in vivo casi
nula, a pesar de poseer una mayor actividad in vitro y mayor afinidad por su
receptor (EPOR) que la hEPO nativa. Las glicosilaciones generan limitaciones en
la producción de la rhEPO y las principales ventajas que le otorgan a la hormona
son un aumento de peso molecular y una disminución de la afinidad por EPOR.
Considerando esto, en el presente trabajo generamos y evaluamos variantes de
rhEPO aglicosilada, fusionada al dominio Fc de IgG1 humana y con mutaciones
en los aminoácidos que interactúan con el receptor. Finalmente evaluamos las
variantes generadas mediante ensayo in vitro en la línea celular TF-1 y obtuvimos
que el cambio de fenilalanina 48 por alanina genera una proteína que recupera
un comportamiento in vitro similar a una rhEPO glicosilada.