Resumen:
El trabajo presentado en esta tesis contempla la implementación experimental y el
desarrollo de programas computacionales para llevar a cabo la técnica conocida como
Microscopía de Desenfoque con el propósito de utilizarla en el estudio de organismos
biológicos. Junto con esto se realiza una aplicación nueva de esta técnica, que consiste en
investigar, en tiempo real, como la droga antinflamatoria Naproxeno afecta las membranas
de los glóbulos rojos humanos (eritrocitos).
El primer estudio realizado mediante Microscopía de Desenfoque fue la visualización
y reconstrucción tridimensional de los eritrocitos, lo que permitió diferenciar de forma
clara las etapas de deformación que sufrió su membrana debido a la interacción con
la droga. Los primeros cambios de forma observados, a medida que la droga entraba
al eritrocito, fueron aquellos que llevaron a este desde su forma de discocito hacia una
forma de bordes ondulados y a medida que la concentración fue aumentando empezaron
a aparecer espículas o protuberancias, hasta cambiar completamente su forma hacia una
estructura erizada denominada equinocito, propia de una anomalía llamada equinocitosis.
Como resultado importante, se observó que los cambios producidos por el Naproxeno son
reversibles y que mediante una disminución de la concentración de droga en la solución,
esta puede salir de la membrana recuperando el eritrocito su forma original (discocito).
Las reconstrucciones tridimensionales permitieron estimar el área y volumen de los eritrocitos
en todas sus etapas, tanto de drogado como de recuperación. El resultado indicó
cambios de área y volumen muy pequeños y sin ningún comportamiento monotónico, lo
que permite descartar procesos de ingreso o salida de líquido entre el medio interno de los
glóbulos rojos y el exterior, fenómenos típicos que ocurren por modificaciones de PH de la
solución, y concluir que las deformaciones ocurren exclusivamente por efecto de la droga.
El segundo estudio realizado consistió en la medición de fluctuaciones que ocurren
en la membrana del eritrocito, debido a interacciones térmicas y procesos metabólicos
internos. Las fluctuaciones disminuyeron a medida que la concentración de droga aumentaba,
lo cual puede significar una modificación de la elasticidad y de la vitalidad del
glóbulo rojo.
Las experiencias realizadas y sus resultados, permiten establecer que las técnicas
de Microscopía de Desenfoque, como fueron implementadas, constituyen una eficaz
herramienta para estudios biológicos, motivando la realización de nuevos experimentos.