Levaduras nativas para el biocontrol de Botrytis cinerea Pers. en uva de mesa y determinación de sus mecanismos de acción.

Abstract

Botrytis cinerea Pers., agente causal de la pudrición gris es el principal problema fitosanitario en uva de mesa en Chile, se ha controlado tradicionalmente con fungicidas. Sin embargo, la creciente demanda de alimentos libres de pesticidas, hace necesario reducir el uso de fungicidas, siendo el control biológico con levaduras una alternativa promisoria. En este estudio 125 levaduras aisladas desde la superficie de uva de mesa y manzana fueron evaluadas para el control de B. cinerea in vitro e in vivo. Diez aislados fueron seleccionados por su capacidad de inhibición del crecimiento miceliar de B. cinerea in vitro. En los ensayos in vivo estas levaduras fueron evaluadas a 20 °C en bayas 'Thompson Seedless' por 7 días, seleccionando tres aislados (m11, me99 y ca80), los cuales redujeron significativamente la incidencia de la pudrición gris. Estos tres aislados de levadura fueron posteriormente evaluados a dos tiempos de colonización en la fruta (2 y 24 h), a diferentes concentraciones (1x107, 1x108 y 1x109 células mL-1) y temperaturas (0 y 20 °C) en bayas de uva 'Thompson seedless'. Los aislados m11, me99 y ca80 redujeron la incidencia de B. cinerea entre un 11,9 y 32,1 %, cuando las bayas fueron sumergidas en una suspensión de levaduras a una concentración de 1x109 células mL-1, 24 h antes de la aplicación de conidias de B. cinerea e incubadas a 20 °C por 7 días. Los mecanismos de acción evaluados en los aislados de levadura fueron la producción de enzimas hidrolíticas, la formación de biopelículas, la resistencia a estrés oxidativo, la actividad antifúngica a distintos pH (4,2, 4,6, 5,0 y 5,4) y la producción de sideróforos. Los tres aislados de 2 levadura produjeron enzimas hidrolíticas quitinasa y β-1,3-glucanasa y una baja resistencia al estrés oxidativo. El pH 4,6 fue el más favorable para la actividad antifúngica en los tres aislados y dos de ellos (me99 y ca80) presentaron la capacidad de producir sideróforos y sólo uno (m11) presentó la capacidad de formar biopelículas. Los aislados fueron identificados mediante análisis PCR-RFLP de la región ITS del ADN ribosómico, correspondiendo a las especies Pichia guilliermondii Wick. (m11) y Aureobasidium pullulans (de Bary) G. Arnaud (me99 y ca80). Estos resultados sugieren que los aislados evaluados (m11, me99 y ca80) poseen más de un mecanismo de acción, los cuales contribuyen en el biocontrol de B. cinerea en uva de mesa.