Efecto de dihidromiricetina y quercetina en la prevención de la resistencia a enzalutamida inducida por LOX-1/OXLDL en células de cáncer de próstata resistente a castración.

Abstract

El cáncer de próstata es el cáncer con mayor incidencia en varones, tanto a nivel mundial como en el país. Para su tratamiento se utiliza la terapia de deprivación de andrógenos (ADT), sin embargo, a pesar de que los pacientes responden inicialmente a ADT, un porcentaje de éstos generan resistencia a dicho tratamiento, produciendo un cáncer de próstata resistente a castración (CRPC). Para el tratamiento de CRPC uno de los fármacos utilizados es la enzalutamida, un antagonista del receptor de andrógenos, que aumenta la sobrevida del paciente y sus efectos secundarios son en su mayoría leves. A pesar de su efectividad, muchos pacientes desarrollan resistencia a enzalutamida principalmente a través de: 1) la sobreexpresión de receptor de andrógenos, y 2) la sobreexpresión de isoformas del receptor de andrógenos, como AR-V7, la cual no presenta un dominio de activación y se comporta como una variante constitutivamente activa de este receptor. La transcripción de AR y AR-V7, es regulada en parte por el factor transcripción NF-κB, el cual puede ser activado por especies reactivas de oxígeno (ROS). En caso de CRPC resistente a enzalutamida, se comienza un nuevo tratamiento con drogas como docetaxel y/o cabazitaxel, sin embargo, la aparición de nuevos efectos secundarios y el cambio de tratamiento puede conllevar a un deterioro en la calidad de vida del paciente. Estos antecedentes evidencian la necesidad de encontrar blancos terapéuticos que permitan prevenir el desarrollo de resistencia a enzalutamida. Nuestro grupo de investigación ha demostrado que en células de cáncer de próstata CRPC, tratamientos con oxLDL generan un aumento en los niveles de ROS, además de promover la activación de NF-κB. Por otra parte, se conocen una gran cantidad de metabolitos secundarios que tienen actividad antioxidante, en este sentido se han aislado desde Maytenus disticha compuestos a los que se les ha reportado tal actividad como dihidromiricetina y quercetina. La hipótesis de la presente tesis es que los flavonoides dihidromiricetina y quercetina obtenidos desde M. disticha previenen el desarrollo de resistencia a enzalutamida, inducida por oxLDL a través de la prevención de la generación de ROS y la consecuente inhibición de la activación de la vía NF-κB. El objetivo general es analizar el efecto de los flavonoides dihidromiricetina y quercetina sobre la resistencia a enzalutamida inducida por LOX-1/oxLDL en líneas celulares de cáncer de próstata. Así, planteamos dos objetivos específicos, primero determinar la función de LOX-1/oxLDL en la resistencia a enzalutamida mediada por la activación de la vía NF-κB. Evaluaremos el efecto de la activación de LOX-1/oxLDL en líneas celulares de CRPC, C4-2B, sobre la activación de la vía NF-κB y la generación de resistencia a enzalutamida. Como segundo objetivo planteamos determinar el efecto de los flavonoides dihidromiricetina y quercetina en la prevención de la resistencia a enzalutamida inducida por LOX-1/oxLDL. Se expresó de forma transiente un promotor mínimo de p65 asociado a reportero de luciferasa en línea celular C4-2B y se evaluó el efecto del silenciamiento de LOX-1 y su repercusión sobre la activación de la vía NF-κB con o sin tratamientos de oxLDL. De la misma manera, se evaluó la fosforilación de NF-κB e IκB con tratamientos con y sin oxLDL mediante western blot. Así como también los efectos de LOX-1/oxLDL en la expresión de marcadores asociados a la resistencia a enzalutamida (AR y AR-V7) y el efecto de LOX-1/oxLDL en la citotoxicidad de enzalutamida. Para el desarrollo del segundo objetivo, se purificaron los flavonoides dihidromiricetina y quercetina desde M. disticha y se analizó su capacidad en la prevención de formación de ROS, activación de NF-κB y la generación de resistencia a enzalutamida inducida por LOX-1/oxLDL. Nuestros resultados demuestran que la activación de LOX-1 mediada por oxLDL aumenta los niveles de ROS, fosforilación de NF-κB p65 e IκB, expresión de AR y AR-V7, además de disminuir la citotoxicidad de enzalutamida. El extracto total de M. disticha previene las fosforilaciones de IκB y NF-κB p65, además de la expresión de AR, en cambio no presenta diferencias en la generación de ROS ni en la expresión de AR-V7 inducidos por oxLDL. Por otra parte, quercetina previene dichos aumentos provocados por LOX-1/oxLDL en células C4-2B. Dihidromiricetina en tanto, previene las fosforilaciones de NF-κB e IκB, pero aumenta la generación de ROS y la expresión de AR, aunque no presenta diferencias en la expresión de AR-V7. La evaluación de la citotoxicidad de enzalutamida en células tratadas con oxLDL y quercetina previno los efectos de resistencia provocados por oxLDL, en cambio dihidromiricetina no tuvo efecto alguno sobre ésta.