Propuesta metodológica para la caracterización molecular específica de ralstonia solanacearum basada en el marcador molecular adn ribosomal 16s

Abstract

Ralstonia solanacearum es el principal patógeno causante de la enfermedad marchitez bacteriana, la que se encuentra distribuida en más de 80 países, reportando pérdidas de hasta el 100% de producción de más de 250 especies vegetales. R. solanacearum se ha descrito como patógeno cuarentenario, considerado una amenaza para la agricultura mundial debido a la capacidad que tiene de producir infecciones latentes asintomáticas que favorecen su diseminación global, dificultando el control de la enfermedad. La supervivencia saprofita y la propagación eficiente de este patógeno han sido las principales causas para elaborar exitosas medidas de control para su erradicación. Es por esto que el desarrollo de herramientas de detección específicas y sensibles son necesarias para su identificación y caracterización. Actualmente, existen diferentes metodologías fenotípicas, bioquímicas y moleculares para la caracterización de R. solanacearum. Sin embargo, estas metodologías presentan grandes dificultades para su implementación ya que no son exclusivas para R. solanacearum. En el presente trabajo, se abordó la problemática de discriminar en forma selectiva cepas de R. solanacearum. Para esto, se utilizaron herramientas bioinformáticas basadas en la secuenciación del gen 16S ADN ribosomal, las que permitieron confirmar que la estrategia de aislamiento convencional no permite aislar en forma selectiva únicamente cepas de R. solacearum, sino que también otras especies que se encuentran en co-cultivo junto a este patógeno. Nuestros resultados demostraron que la metodología diseñada en esta tesis permite identificar cepas axénicas de R. solanacearum y bacterias saprofitas pertenecientes a los órdenes Enterobacterales y Pseudomonadales. En su conjunto, estos resultados permitieron identificar una región genómica conservada única en R. solanacearum para diseñar partidores específicos para la especie, los cuales pueden ser útiles para la identificación molecular de este patógeno de gran importancia agrícola y comercial.