Alarcón Contreras, José LeonardoAlarcón Contreras, Valentina2013-12-132019-11-262024-05-152024-08-282013-12-132019-11-262024-05-152024-08-282013https://repositorio.udec.cl/handle/11594/765Tesis (Magister en Bioquímica y Bioinformática)2013En eucariontes el ADN nuclear se encuentra a la forma de un complejo multiproteico denominado cromatina, cuya unidad básica es el nucleosoma. La unión de factores de transcripción y la ARN polimerasa a promotores de genes determina la actividad transcripcional. Estos elementos se distribuyen de manera modular en las regiones promotoras de genes y esta distribución es de gran importancia para su correcta acción. En este contexto, la accesibilidad de las proteínas regulatorias puede ser modulado por la distribución de nucleosomas en las regiones regulatorias de un gen. El estado de compactación de la cromatina puede ser alterado por complejos remodeladores de cromatina ATP-dependientes (Ej SWI/SNF, RSC), y varios factores de transcripción pueden reclutar estos complejos hacia regiones regulatorias, llevando la acción remodeladora a puntos específicos del genoma. Si bien en el presente existe evidencia, que apunta a la influencia que secuencias de ADN pueden tener sobre la actividad remodeladora dependiente de ATP, los mecanismos involucrados no se conocen con profundidad . Actualmente, se desconoce si la variación de distancia y la presencia de ADN-Z (una de las conformaciones que puede adoptar el ADN) entre el sitio de unión de uno de estos factores de transcripción y un nucleosoma podría influenciar la actividad remodeladora de la maquinaria ATP-dependiente. Con el objeto de abordar esta problemática se realizaron ensayos de remodelación in vitro usando diferentes probadores mononucleosomales, variando la distancia entre el sitio de unión del factor de transcripción Gal4 y un nucleosoma. Para el caso del ADN-Z utilizamos secuencias con tendencia a adoptar la conformación Z entre el nucleosoma y el sitio de unión para el factor de transcripción Gal4. El efecto de estos dos factores fue evaluado en presencia del complejo SWI/SNF de levadura y el factor de transcripción quimérico Gal4-VP16. Bajo nuestras condiciones de ensayo, SWI/SNF tuvo un requerimiento absoluto de Gal4-VP16 para poder asociarse al probador mononucleosomal. Nuestros resultados muestran que el desensamblaje nucleosomal fue mayor cuando la distancia entre el nucleosoma y el sitio de unión de Gal4 fue menor. También observamos que la extensión del ADN extranucleosomal influye en la fuerza de unión de SWI/SNF a los nucleosomas. Respecto al ADN-Z, nuestros resultados muestran que el desensamblaje de nucleosomas es mayor en presencia de secuencias con tendencia a adoptar la conformación Z, comparado con secuencias normales. Nuestros resultados apuntan a nuevos aspectos que podrían tener un impacto sobre la expresión génica en el nivel de regulación transcripcional.spaCreative Commoms CC BY NC ND 4.0 internacional (Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional)Transcripción GenéticaRegulación GenéticaADN PolimerasasCromatinaAdenosina TrifosfatasaSecuencia de AminoacidosTesis