Desarrollo y caracterización de un candidato vacunal recombinante contra Hantavirus basado en las glicoproteínas de superficie del virus Andes.

Abstract

El Síndrome Cardiopulmonar causado por Hantavirus (SCPH) es una enfermedad endémica de Chile y de elevada mortalidad. En nuestro país, el virus Andes es el agente etiológico de esta patología. Su transmisión ocurre principalmente por contacto con excreciones y secreciones de roedores infectados, pero en el caso particular del virus Andes también es posible la transmisión de persona a persona. Actualmente, no existen vacunas ni tratamientos para esta patología. Sin embargo existe evidencia que demuestra que anticuerpos neutralizantes contra las glicoproteínas Gn y Gc de Hantavirus son suficientes y necesarios para proteger de la infección y desarrollo de SCPH en hámsteres sirios, modelo animal de esta enfermedad. Con el objetivo de desarrollar una vacuna contra SCPH, se desarrollaron distintos antígenos para ser probados como candidatos vacunales. Inicialmente, se diseñaron antígenos consistentes en los dominios expuestos de las glicoproteínas Gn y Gc de virus Andes, denominados sGn y sGc. Fueron expresados en células de mamíferos transducidas con un vector adenoviral y posteriormente purificados. Los antígenos fueron reconocidos por el suero de pacientes sobrevivientes de SCPH. Sin embargo, los bajos niveles de expresión de los antígenos limitan el uso de estos como candidato vacunal. En vista de estos resultados, los antígenos fueron modificados para su expresión en levaduras, denominados Gns y Gcs. Al ser co-expresados, los antígenos Gns y Gcs parecen formar agregados de alto peso molecular y altamente estables. Ambos antígenos fueron solubilizados, purificados y posteriormente replegados. En paralelo, se trabajó en un antígeno recombinante basado en epítopes lineales presentes en las proteínas Gn, Gc y N de virus Andes. Este antígeno, denominado AndesVac, fue expresado de manera insoluble en bacterias. El antígeno AndesVac solubilizado fue purificado con una pureza superior al 95% luego de un único paso de IMAC. Finalmente, los antígenos purificados fueron empleados en un ensayo de inmunización en hámsteres sirios. Tanto el complejo antigénico Gns-Gcs como AndesVac, fueron capaces de inducir una respuesta de anticuerpos IgG totales significativa. La formulación capaz de generar mayores títulos de anticuerpos neutralizantes consiste en el complejo antigénico Gns-Gcs adyuvado con Alhydrogel, la cual también generó títulos significativos de anticuerpos neutralizantes y una elevación de los niveles relativos de ARNm de las citoquinas IL-12, IFN-γ e IL-6.