Purificación de la proteína recombinante F1 del autotransportador SigA de Shigella flexneri 2a 2457T.

Abstract

Shigella spp. es conocida por provocar cuadros diarreicos que pueden llegar a ser fatales. Afecta a gran parte del mundo, siendo S. flexneri y S. sonnei las especies más prevalentes. Aunque no existe una vacuna comercial para estas especies, actualmente se trabaja en desarrollar una, siendo la proteína SigA (especialmente el fragmento F1) presente en la cepa S. flexneri 2a 2457T, un buen candidato para el desarrollo de vacunas proteicas para dicho género, debido a su presencia en otras especies de Shigella spp. de importancia epidemiológica. Por lo anterior, es que se propone inducir la expresión de este a través del vector pET-22b en E. coli BL21 para su posterior purificación. Mediante técnicas de ADN recombinante se construyó un plásmido que contuviera la secuencia codificante para el fragmento F1 y se transformó E. coli BL21 para que incluyera el plásmido en su genoma. Luego, se indujo la expresión del fragmento F1 (mediante inducción por IPTG) para posteriormente purificarlo mediante cromatografía de afinidad utilizando la columna HisTrap FF crude. La presencia de la proteína recombinante se evaluó mediante inmunodetección utilizando la técnica Western Blot. Los resultados del Western Blot muestran la presencia del fragmento F1 tanto en el proceso de inducción y como el proceso de purificación. En conclusión, el método de purificación por cromatografía de afinidad demostró ser un modelo viable para la purificación del fragmento recombinante F1 del autotransportador SigA presente en S. flexneri 2a 2457T.