Resumen:
Los programas de mejoramiento genético requieren de sistemas de propagación
eficientes que permitan la masificación de las plantas mejoradas. A esta necesidad se
suma el hecho de que la selección de la mayoría de las características fenotípicas de los
individuos se realiza en estado adulto, lo que conlleva a la necesidad de revigorizar el
material seleccionado para propagación. Dentro de las vías de cultivo de tejidos más
utilizada en leñosas, se encuentra el cultivo de callos para obtener morfogénesis vía
indirecta, lo que permite la revigorización del material a propagar. Sin embargo, en
nogal (Juglans regia L.) no existen reportes de reconversión de plantas a través de esta
vía.
Debido a la problemática antes mencionada, este estudio pretende asentar las bases de la
morfogénesis a partir de material adulto de Juglans regia L. Para ello, se estableció
como objetivo general evaluar diferentes vías de cultivo in vitro de material adulto de
nogal como técnicas de propagación vegetativas de plantas provenientes de invernadero.
Para ello, en una primera etapa, se evaluó el efecto del medio de cultivo en la respuesta
morfogénica de los cultivos de callo provenientes de material adulto de nogal. Para ello,
se compararon los medios de cultivo Broadleaves Tree (BTM), Murashige y Skoog
(MS), Driver Kuniyuki Walnut (DKW) y Woody Plant (WPM). Se utilizaron segmentos
foliares los que, previa esterilización superficial, fueron dispuestos en cada medio de
cultivo suplementado con 21,4 μM de ácido naftalén acético (ANA) y 8,8 μM de
bencilaminopurina (BAP). Los resultados mostraron que no existen diferencias
significativas en la inducción de callogénesis entre los medios evaluados; pero el
porcentaje de callos nodulares fue significativamente mayor en los medios BTM (75%)
y WPM (63%). Sólo en el medio BTM, la histología mostró presencia de zonas
meristemáticas en el interior del macizo, sin que se observara expresión externa de
dichas formaciones. Estos resultados indican que el medio de cultivo influye en las
características morfogénicas del callo resultante, siendo los callos inducidos en el medio
BTM los de mayor potencial morfogénico, al observarse meristemoides en sus primeros
estadíos de organización.
En una segunda etapa se evaluó el efecto de la concentración de ANA en tres niveles
(5,3; 21 y 53μM). También fueron comparados dos tipos de tejidos, recolectados a 15
días de la brotación contra tejidos que tenían 40 días desde la fecha de brotación.
Finalmente para obtener maduración del tejido, se evaluó ácido abscísico (ABA) en tres
concentraciones (11,35; 18,9 y 37μM). Los resultados indicaron que sólo el tratamiento
de 53μM de ANA produce callo morfogénico, presentándose tanto respuestas
organogénicas como embriogénicas en el mismo macizo. La edad del material
evidenció diferencias significativas en sus respuestas, presentando mayor tasa de callos
morfogénicos en tejidos de 15 días desde la brotación (75%) respecto de callos
provenientes de tejidos de 40 días desde la brotación (26%). Finalmente, la
concentración de ABA no arrojó diferencias respecto de los estados de desarrollo
observados en las tres concentraciones evaluadas; sin embargo, se observó una
detención de la proliferación embriogénica en la concentración de 37μM de ABA.
Finalmente, con el objeto de analizar la estabilidad génica en futuros programas de
masificación de plantas basados en morfogénesis vía indirecta, se analizó la fidelidad
clonal con respecto al material parental de callos provenientes de material adulto de
nogal mediante la técnica de RAPDs.
Para ello, se utilizaron hojas provenientes de material adulto de nogal cv Chandler, a las
que se indujo callogénesis utilizando 21,4 μM de ácido naftalénacético (ANA) y 8,8 μM
6-bencilaminopurina (BAP), en medio BTM. Luego de 60 días, se extrajo ADN
mediante el método del CTAB tanto a los callos producidos como a la planta madre. El
ADN de ambas fuentes fue amplificado por PCR utilizando 6 partidores distintos. No
hubo diferencias entre el patrón de fragmentos de la planta madre y las líneas
callogénicas analizadas. Estos resultados permitieron concluir que hasta el momento no
existe evidencia de alteraciones en la estabilidad génica de callos originados de hojas
adultas de Juglans regia L.
De acuerdo a los resultados globales se permite concluir que es posible inducir las
primeras etapas de respuestas morfogénicas a partir de material adulto de nogal Juglans
regia L. cv Chandler, por lo que la vía indirecta de regeneración de plantas sería
potencialmente factible de establecer a futuro.