Resumen:
El test de penetración espermática múltiple de zonas pelúcidas se basa en la inactivación
de oocitos mediante la solución hipertónica STORE-UDEC, que aumenta el espacio
perivitelino y neutraliza la reacción de zona, permitiendo cuantificar espermatozoides en
el espacio perivitelino y aumentar la sensibilidad de los estudios destinados a evaluar la
fertilidad potencial de machos y eyaculados.
Zonas pelúcidas obtenidas de oocitos madurados in vitro, fueron coincubadas con
espermatozoides expuestos a condiciones de capacitación y dejados interactuar por 18
horas a 38,5ºC y 5 %CO2 en aire. Luego las zonas fueron limpiadas mecánicamente, de
espermatozoides adheridos y aquellos que penetraron el espacio perivitelino fueron
cuantificados rotándolas en un portaobjeto excavado bajo microscopía de contraste de
fase diferencial. Se evaluó el efecto del tiempo de incubación de zonas pelúcidas (0,6 y
18 horas), la concentración de heparina en la incubación (0, 10, 25, 50 y 100 g/mL) y el
grado de maduración de los oocitos (VG, MI y MII) sobre la eficiencia de penetración
espermática.
La evaluación de la eficiencia de penetración espermática se hizo en términos de tasas de
penetración espermática y número de espermatozoides en el espacio perivitelino (spz en
EPV); el tiempo de incubación de zonas pelúcidas mostró diferencias significativas
(P0,05) entre 0 hr=60% (3,8 spz en EPV) v/s 6 hrs=97,1% (9 spz en EPV) y 18
hrs=100% (7,9 spz en EPV). La heparina en diferentes concentraciones no incide en la
eficiencia de la penetración espermática 0g/mL=81,3% (4,7 spz en EPV),
10g/mL=79,5% (5,6 spz en EPV), 25g/mL=90,5% (4,9 spz en EPV),
50g/mL=83,6% (5,3 spz en EPV), 100g/mL=83,6% (5,3 spz en EPV), y en la
evaluación individual de toros se obtuvo similares resultados. En la evaluación del grado
de maduración de oocito se evidenció el efecto de la maduración in vitro en términos de
espermatozoides en el espacio perivitelino VG=78,5% (5,8 spz en EPV), MI=73,3% (6,6
spz en EPV) y MII=97,6% (9,1 spz en EPV).