Aislamiento y caracterización de proteínas del plasma seminal de chivo (Capra hircus) por cromatografía de afinidad a fibronectina.

Abstract

Con el propósito de aislar y caracterizar fracciones proteicas del plasma seminal (PS) de chivo, eyaculados de 5 chivos sexualmente maduros (mayor de 6 meses) fueron colectados por vagina artificial. El plasma seminal fue centrifugado, posteriormente precipitado con etanol frio y nuevamente centrifugado. El pellet obtenido de la última centrifugación, fue resuspendido en buffer fosfato salino (PBS) y transferido a una columna de Gelatina-Sepharosa para capturar proteínas que presenten dominio de Fibronectina tipo ll. La columna fue lavada con PBS y eluída con una solución de urea. Las fracciones proteicas recogidas fueron concentradas y luego cuantificadas por el método de Bradford. Para determinar el perfil proteico y la masa molecular fue realizada una electroforesis en geles de poliacrilamida (SDS-PAGE). La cromatografía muestra que se obtuvieron 2 fracciones de proteínas, las que se denominaron A y B. La fracción B reveló la presencia de 4 bandas proteicas, de diferente peso molecular, correspondiendo a las proteínas con dominio de fibronectina tipo II, con masas moleculares de 14 kDa, 15 kDa, 20 kDa y 22 kDa, que representaron un 8,1% del total de proteínas del PS. Las 4 proteínas con dominio de fibronectina tipo II aisladas, podrían utilizarse para estudios adicionales en biología y tecnología espermática