Browsing by Author "Bustamante Campusano, Diego Ignacio"

Now showing 1 - 1 of 1
  • Thumbnail Image
    Item
    Purificación y caracterización estructural de ΔLIM-ALP.
    (Universidad de Concepción, 2025) Bustamante Campusano, Diego Ignacio; Uribe Pérez, Elena Amparo
    La Agmatinase Like Protein (ALP) es una enzima clonada a partir de una librería de ADNc de cerebro de rata y cataliza la hidrólisis de agmatina en putrescina y urea. La agmatina (1-amino-4-guanidinobutano) es una amina que deriva de la descarboxilación de arginina mediante la arginina descarboxilasa (ADC), cumple funciones críticas en mamíferos como neuromodulador, anticonvulsivante y agente neuroprotector. Hasta la fecha, ALP es la única enzima de mamíferos caracterizada cinéticamente con actividad agmatinasa confirmada. A pesar de su función catalítica, ALP muestra una identidad de secuencia mínima con agmatinasas conocidas, y los residuos involucrados en la catálisis o en la coordinación del cofactor Mn²⁺ (ion metálico divalente crítico para la actividad de ALP y otras ureohidrolasas) permanecen sin identificar. Las herramientas actuales de predicción de plegamiento proteico, como la plataforma AlphaFold 3, no logran modelar la estructura de ALP. En el Laboratorio de Enzimología de la Universidad de Concepción, se han clonado varias isoformas de ALP. La variante de ALP más activa y estable contiene 457 aminoácidos y carece de 66 aminoácidos en su extremo carboxilo, esta secuencia se denomina dominio LIM y ejerce un efecto auto- inhibitorio sobre su actividad agmatinasa (ΔLIM-ALP). En este seminario de título, se estableció un protocolo de purificación para ΔLIM-ALP logrando purificar la enzima a homogeneidad y se realizó un análisis de dicroísmo circular (DC) para determinar el contenido de estructura secundaria. El análisis de DC arrojó que ΔLIM- ALP contiene 2,8% de estructuras helicoidales, 34,4% de hojas ß-plegadas, 14,6% de vueltas y 48,1% de zonas al azar o no definidas. Este trabajo proporciona las primeras aproximaciones respecto de la estructura de ALP.
Síguenos en...