Browsing by Author "Castelli Boero, Carla Paola"
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Item Caracterización de la expresión espaciotemporal de Cited2 durante el desarrollo embrionario en Xenopus tropicalis.(Universidad de Concepción, 2025) Castelli Boero, Carla Paola; Torrejón Quezada, Marcela Eliana; Tarifeño Saldivia, Estefanía SaloméLas crestas neurales (CN) son un tejido transitorio que surge durante el desarrollo embrionario de vertebrados, inducido por señales del mesodermo, neuroectodermo y ectodermo no neural. Tras su inducción, las CN experimentan una transición epitelio-mesenquimal, adquiriendo motilidad y migrando hacia diversas regiones del embrión para diferenciarse en una amplia gama de tipos celulares, donde destacamos estructuras craneofaciales y cardiacas. Disrupciones en el desarrollo de las CN podrían generar una o varias neurocristopatías, un grupo de patologías, síndromes y malformaciones congénitas derivadas de las CN. Previamente en nuestro laboratorio, se ha demostrado que Ric-8A, un factor intercambiador de nucleótidos de guanina, juega un papel crucial en la migración de las células de la (CN), y su pérdida de función está asociada a malformaciones craneofaciales. Por otro lado, hemos identificado a Cited2, un transactivador transcripcional con un rol importante en el desarrollo embrionario, como posible interactor de Ric-8A. Sin embargo, poco se conoce tanto de su función como del patrón de expresión de Cited2 en Xenopus. En este trabajo de tesis, se busca caracterizar la expresión espaciotemporal de cited2 en el desarrollo embrionario en Xenopus tropicalis, y compararla con la de ric-8a con el fin de entender a futuro su posible interacción funcional para la formación de CN. Mediante hibridación in situ de embrión completo, se detectó expresión de xtcited2 desde estadio NF 9 hasta NF 45. En etapas tempranas, se observa principalmente en el polo animal y el tejido mesodermal, restringiéndose luego al tubo neural, CN, cerebro y corazón. Análisis de inmunofluorescencia de explantes de CN demostró localización nuclear, lo cual es consistente con su función biológica. La comparación con xtric-8a, mostró que ambos genes se expresan en tejidos neurales y de CN, siendo xtcited2 más ampliamente distribuido y xtric-8a restringido al tubo neural, CN y tejidos derivados. Estos resultados se complementaron con datos de RNA-seq de célula única disponibles públicamente, donde se evaluó la expresión de ambos genes en tejidos que se derivan a CN craneal y se observó un patrón idéntico de ambos genes en este contexto. Además, se analizó un set de datos de CN total en estadio NF 18 con el fin de identificar una subpoblación de CN cardiaca. Se aplicaron técnicas bioinformáticas de reducción de dimensionalidad y búsqueda de clústeres, junto a un modelo de clasificación de Random Forest para evaluar la importancia de genes. Se identificaron 3 clústeres bien definidos con potenciales marcadores por clúster. Sin embargo, no se logró identificar una subpoblación cardiaca con certeza debido a limitaciones con el pipeline utilizado. Entre estas, se incluye el uso de un set de datos correspondiente a un estadio temprano del desarrollo (NF18), la alta similitud transcripcional entre células de la CN, y la influencia dominante de un único gen (gsk3b) sobre el modelo de clasificación, lo que podría haber apantallado las diferencias entre otros genes.