Browsing by Author "Coliboro Dannich, Viviana Ivelise"

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    Efecto de NUAK1 en el splicing de G6PD dependiente de hnRNPK en células de cáncer colorrectal.
    (Universidad de Concepción, 2023) Coliboro Dannich, Viviana Ivelise; Castro Alma, Ariel Fernando; Pincheira Barrera, Roxana
    El cáncer es una patología con elevada incidencia y mortalidad a nivel mundial, donde destaca el cáncer colorrectal. A nivel molecular, las células tumorales requieren reprogramar su metabolismo para poder sobrevivir a condiciones de estrés o permitir la patológica tasa de crecimiento y proliferación. En consecuencia, las células tumorales presentan elevada tasa biosintética, bioenergética alterada y necesidad de balance redox. En particular, se encuentra alterada la vía de las pentosas fosfato, que se ha descrito como fundamental en la transformación neoplásica. Esta vía es regulada principalmente a través de los niveles de G6PD, la enzima limitante. Esta enzima incrementa su expresión frente a distintos contextos, como el estrés oxidativo o el factor de crecimiento insulina. Adicionalmente se ha descrito como blanco de múltiples oncogenes. Un tipo de regulación para G6PD ocurre a nivel post-transcripcional, donde la ribonucleoproteína hnRNPK regula negativamente sus niveles de ARNm maduro al unirse al exón 12 y promover la retención de intrones. De manera interesante, en nuestro laboratorio encontramos que hnRNPK es un interactor nuclear de la quinasa NUAK1 y presenta potenciales sitios de fosforilación para esta quinasa, en los residuos de serina89 y serina417. NUAK1 es una serina/treonina quinasa de la familia de las AMP quinasas que está sobre expresada en diferentes tipos de cáncer y que se ha relacionado con una menor sobrevida y un peor pronóstico en general. Según los antecedentes, propusimos que NUAK1 favorece la respuesta proliferativa al fosforilar a hnRNPK, inactivándola e interfiriendo con su acción en el splicing de G6PD. Para dilucidar esta relación, estudiamos el rol de NUAK1 en el procesamiento de G6PD mediado por hnRNPK. Realizamos modelamientos moleculares para evaluar si la fosforilación de residuos serina89 y serina417 puede inducir un efecto inhibitorio en la unión de hnRNPK al pre-ARNm de G6PD. Obtuvimos un cambio conformacional que impide a la hnRNPK unirse al exón 12 de G6PD de manera eficiente. Por otro lado, evaluamos el efecto de NUAK1 en el procesamiento de G6PD, en la unión de hnRNPK con el ARNm inmaduro de G6PD y adicionalmente diseñamos un reportero de splicing de doble luciferasa. Encontramos que en la línea HCT116P53-/-, NUAK1 favorece el procesamiento del ARNm inmaduro de G6PD asociado a su regulación sobre hnRNPK. Nuestros hallazgos indican que NUAK1 regula los niveles de G6PD, y lo proponen como un potencial promotor de la vía de las pentosas.
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