Browsing by Author "Elizondo Vega, Roberto Javier"
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Item Análisis del perfil metabolómico y de los micro ARN de nanovesículas extracelulares pequeñas derivadas de células madre/estromales mesenquimales tratadas con oligomicina.(Universidad de Concepción, 2024) Lagos Aillon, Raul Alejandro; Elizondo Vega, Roberto Javier; Pérez de Armas, AndyLa osteoartritis (OA), es un trastorno articular caracterizado por la pérdida de cartílago hialino, alteraciones óseas e inflamación sinovial (IS), lo que conduce a dolor crónico y discapacidad progresiva. Las terapias celulares basadas en células madre/estromales mesenquimales (MSC) destacan por su capacidad para promover la regeneración del cartílago y reducir la IS. Antecedentes de nuestro equipo de investigación han explorado el impacto de la inducción de un metabolismo glucolítico mediante oligomicina (OLG) en las MSC, y sobre las vesículas extracelulares pequeñas derivadas (sEV) de MSC, en sus propiedades inmunomoduladoras y regenerativas. Datos no publicados indican que sEV de MSC pre-tratadas con OLG promueven el desarrollo de nuevo cartílago y reducen la inflamación en modelos de OA murinos. Para profundizar en los posibles mecanismos asociados a los efectos funcionales de las sEV, hemos decidido determinar el contenido del metaboloma, lipidoma y miRNA de las sEV derivadas de MSC de cordón umbilical (MSC-UC), y analizar su asociación con propiedades condroprotectoras y anti-inflamatorias. Mediante un análisis de secuenciación dirigida, identificamos un aumento significativo en la expresión de 178 miRNA bajo el tratamiento con OLG en sEV derivadas de MSC-UC. Diversos genes blanco de estos miRNA se encuentran asociados a la vía de señalización de TGF-β, la vía de señalización de p53, así como a genes que potenciarían cambios metabólicos. Los análisis metabolómicos a través de espectrometría de masa revelaron la presencia de metabolitos polares como estreptomicina y apolares como prostaglandina D, ácidos grasos y ácido palmítico. Finalmente, un análisis detallado del contenido de estos miRNA, nos permiten establecer una asociación entre el uso de sEV derivados de MSC-UC glucolíticas con sus efectos regenerativos y anti-inflamatorios. Este estudio contribuye a la profundización de los mecanismos asociados a la funcionalidad de las terapias basadas en sEV en el tratamiento de la OA.Item Caracterización de la respuesta inflamatoria periférica y central en un modelo de depresión inducido por un asilamiento social en hembras.(Universidad de Concepción, 2024) Cepeda Barrales, María Yamila; Oyarce Merino, Karina; Elizondo Vega, Roberto JavierLa depresión es un trastorno psiquiátrico que afecta profundamente la calidad de vida de las personas. A nivel mundial, 4,4% de la población padece esta afección, con mayor prevalencia entre las mujeres. Los conocimientos sobre las vías moleculares precisas que subyacen a la depresión aún no se han dilucidado por completo. Sin embargo, la evidencia acumulada a partir de estudios en roedores, donde se induce un comportamiento depresivo mediante estrés psicosocial, sugiere la participación de múltiples sistemas biológicos, incluidos el sistema neuroendocrino, el sistema inmunitario y los circuitos neurales. Evidencia reciente indica que la alteración en las respuestas inmunes periféricas y la neuroinflamación orquestada por la microglía están involucradas en la patogénesis de la depresión y podrían explicar la ineficacia del tratamiento convencional en un tercio de los pacientes. Lamentablemente, la mayoría de las observaciones provienen de modelos murinos de estrés en machos, aunque se sabe que existe dimorfismo sexual en la respuesta al estrés y la sintomatología depresiva. Por ello, el objetivo de este proyecto es evaluar el efecto del estrés por aislamiento social (AS) en la inflamación periférica y la neuroinflamación en ratones hembra. Se caracterizaron patrones conductuales asociados a comportamiento depresivo en ratones hembra sometidas a AS durante 7 semanas. Además, se evaluó la inflamación sistémica y la neuroinflamación a nivel del hipocampo, analizando distintas poblaciones celulares y la expresión de citoquinas pro y antiinflamatorias.Item Participación de los transportadores de monocarboxilatos hipotalámicos en la regulación de la ingesta alimenticia.(Universidad de Concepción, 2016) Elizondo Vega, Roberto Javier; García Robles, María de los ÁngelesLa detección de glucosa en el hipotálamo es un proceso crucial que regula el comportamiento alimenticio, la cual a través de la detección de cambios en la concentración de glucosa por células cerebrales, produce en respuesta la liberación de neuropéptidos orexígenos y anorexígenos. Las neuronas del núcleo arqueado (NA) han sido clásicamente identificadas como las células responsables del mecanismo glucosensor hipotalámico, a través de mecanismos directos de detección; sin embargo, estudios recientes han demostrado la existencia de un acoplamiento metabólico entre tanicitos y neuronas del NA, el cual sería mediado por lactato, mecanismo que podría contribuir a este proceso. Los transportadores de monocarboxilatos 1 (MCT1) y 4 (MCT4), son las principales transportadores de monocarboxilatos expresadas por tanicitos, los cuales facilitan la liberación de lactato a neuronas del NA, mientras que MCT2 es el principal transportador expresado por neuronas hipotalámicas. Nosotros hipotetizamos que los tanicitos interaccionan con las neuronas hipotalámicas a través de monocarboxilatos para regular la ingesta alimenticia, por lo tanto la inhibición de MCT1 y/o MCT4 podría alterar el acoplamiento metabólico entre tanicitos y neuronas del NA. Para evaluar esto, inhibimos la expresión de MCT1 y/o MCT4 a través de la transducción de shARN mediado por partículas adenovirales inyectadas en el tercer ventrículo, permitiendo la transducción de ependimocitos y tanicitos. Utilizando estos animales knockdown para MCT1 y/o MCT4, evaluamos la expresión de neuropéptidos en respuesta a la inyección intracerebroventricular de glucosa, como el comportamiento alimenticio luego de un periodo de ayuno. Nuestros resultados muestran una pérdida de la regulación de la expresión de neuropéptidos orexígenos mediada por glucosa, y una expresión anormal de neuropéptidos anorexígenos en respuesta al ayuno. Esto se ve acompañado por un incremento en la ingesta alimenticia y un incremento en el peso corporal en animales knockdown para MCT1, y una disminución de la saciedad en animales knockdown para MCT4. Por otro lado, la doble inhibición de MCT1 y MCT4, es capaz de producir un incremento en la ingesta alimenticia, un incremento del peso corporal y una disminución de la saciedad. En conjunto, estos resultados indican que la expresión de MCT1 y MCT4 posee un relevante rol en la regulación del comportamiento alimenticio.Item Participación del receptor de lactato hipotalámico HCAR1 en la regulación de la ingesta de alimentos mediada por neuronas POMC.(Universidad de Concepción, 2026) López Fonseca, Sergio Augusto; García Robles, María de los Ángeles; Elizondo Vega, Roberto JavierLa obesidad es una epidemia global resultante del desbalance energético crónico, cuya regulación depende críticamente de la capacidad del hipotálamo para detectar nutrientes circulantes. El núcleo arqueado (ARC) en el hipotálamo alberga las neuronas pro-opiomelanocortina (POMC), que promueven la saciedad y aumentan el gasto energético. Si bien, se ha demostrado que el lactato producido y liberado por tanicitos en respuesta a glucosa, incrementa la excitabilidad de las neuronas POMC, en un mecanismo que involucra su transporte, se desconoce su rol como molécula señalizadora intercelular. A pesar de que el lactato activa estas neuronas, carecen del receptor de lactato HCAR1, que sí se expresa en astrocitos hipotalámicos. Esta tesis investigó si el lactato producido por tanicitos promueve la activación de HCAR1 en astrocitos hipotalámicos, incrementando la actividad de neuronas POMC. Confirmamos la expresión de HCAR1 en una subpoblación de astrocitos del ARC y células endoteliales empleando inmunofluorescencia e hibridación in situ, e identificamos novedosamente su expresión en neuronas NPY, a través de citometría de flujo. Por medio de imágenes de calcio in vitro e in situ, demostramos que L-Lactato, D-Lactato y el agonista farmacológico 3Cl-HBA activan HCAR1 en astrocitos, induciendo incrementos robustos en la concentración de calcio intracelular a través de una vía no canónica. Esta respuesta de calcio desencadenó la liberación de glutamato, proceso conocido como gliotransmisión, mediada parcialmente por la apertura de hemicanales de conexina 43, proceso que fue suprimido por el silenciamiento génico de HCAR1 (siRNA/shRNA) o el bloqueo de hemicanales. En experimentos in situ de patch-clamp en neuronas POMC, la estimulación con lactato incrementó la frecuencia de corrientes lentas (SICs), asociadas a gliotransmisión. Estos eventos fueron bloqueados por el antagonista de receptores NMDA, D-AP5, mientras que el silenciamiento específico de HCAR1 en astrocitos, redujo significativamente la frecuencia de SICs in situ. Además, demostramos un acoplamiento funcional en el que la perfusión de glucosa en un tanicito único indujo ondas de calcio en astrocitos adyacentes, de manera dependiente de HCAR1 astroglial. En conclusión, estos hallazgos establecen un nuevo circuito de integración metabólica en el ARC, donde el lactato liberado por tanicitos no solo activa directamente a las neuronas POMC, sino que también actúa por un mecanismo indirecto que involucra la gliotransmisión glutamatérgica extrasináptica inducida por la activación de HCAR1 en astrocitos del ARC. Este mecanismo revela un rol activo y regulatorio de la glía en la homeostasis energética y posiciona al receptor HCAR1 como un blanco potencial para el tratamiento de desórdenes metabólicos.