Browsing by Author "Encina Roco, Antonia Rayen"

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    Determinación de la contaminación fecal a través del gen uidA (Beta-D-glucuronidasa) en muestras de agua ambientales.
    (Universidad de Concepción, 2025) Encina Roco, Antonia Rayen; González Saldía, Rodrigo
    La determinación de la contaminación fecal de los cuerpos de agua es una preocupación a nivel mundial. Los métodos tradicionales como la fermentación en tubos múltiples (FTM), aunque ha demostrado ser efectivo, requieren tiempos extensivos (entre 48-96 horas) y su capacidad de respuesta es limitada ante situaciones de emergencias sanitarias. En búsqueda de soluciones, los métodos moleculares han sido clave por su rapidez y especificidad, por lo tanto, el presente estudio evaluó la utilidad del gen uidA, que codifica la enzima β-D glucuronidasa, como marcador molecular para la detección y cuantificación de Escherichia coli (principalmente) en muestras de agua ambientales, con énfasis en su aplicación en agua de mar. En el presente trabajo, se estandarizó una técnica de PCR convencional y cuantitativo para la detección del gen uidA, mediante dos experimentos de microcosmos en agua de mar en condiciones controladas. Los experimentos fueron montados utilizando material fecal fresco de animales de cría. Posteriormente, con la técnica estandarizada, se analizaron muestras ambientales provenientes de agua de mar, dulce y agua subterránea de distintas localidades de la región del Biobío y Ñuble. La estandarización de la técnica mediante PCR convencional permitió obtener un fragmento amplificado de aproximadamente 160 pares de bases, que corresponde al tamaño descrito en la literatura. La curva de calibración construida con este fragmento para el PCR cuantitativo tuvo un límite de detección de 1x102 copias/µL. Los resultados del experimento de microcosmos se ajustan a un modelo de regresión lineal (log-log), positivo y significativo (p<0.05), entre el número más probable de coliformes fecales (NMP/100mL) y el número de copias del gen uidA (copias del gen uidA/100mL), detectadas por qPCR. No obstante, el análisis estadístico de las muestras ambientales muestra que no existe una correlación significativa entre estas variables. En conclusión, la detección de este gen correlaciona bien con la presencia de bacterias de origen fecal termotolerantes en material fresco, no así en muestras ambientales donde existe un ensamble microbiano con células vivas, muertas, trozos de ellas y otros microorganismos no termotolerantes. Sin embargo, ofrece una ventaja importante sobre la técnica de fermentación en tubos en situaciones que requieren una respuesta rápida, pudiendo obtener resultados dentro de 24 horas. Así también, su efectividad en agua subterránea es relevante, puesto que en ese caso la sola presencia de E. coli (vivas o muertas) indicaría la contaminación con material fecal de la napa freática y, por lo tanto, evidenciaría el riesgo sanitario al utilizar este tipo de agua para consumo humano o de animales de cría.
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