Browsing by Author "Mangui Catota, Bryan Alexander"

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    Desarrollo de un anticuerpo de afinidad mejorada contra el antígeno HspX con potencial diagnóstico para tuberculosis.
    (Universidad de Concepción, 2025) Mangui Catota, Bryan Alexander; Camacho Casanova, Frank
    La tuberculosis es la segunda causa de muerte debido a enfermedades infecciosas a nivel mundial. Según datos de la Organización Mundial de la Salud (OMS), en promedio cada año se reportan 10 millones de nuevos casos y 1.3 millones de decesos. La creciente carga sanitaria mundial de la tuberculosis se ve agravada por el alarmante incremento del número de personas infectadas con VIH y de cepas multirresistentes a antibióticos. El mejor pronóstico de la tuberculosis se obtiene con el diagnóstico temprano de la infección, no obstante, los métodos diagnósticos habitualmente empleados (microscópicos, microbiológicos y moleculares) presentan importantes limitaciones: sensibilidad y especificidad variables, diagnóstico subóptimo y, un gran consumo de tiempo y recursos. En el presente trabajo se mejoró la afinidad de un anticuerpo dirigido contra el antígeno HspX derivado de MTB mediante mutagénesis parsimoniosa. Para ello, se seleccionaron posiciones candidatas a mutagénesis de las regiones CDR basándose en el modelado estructural del anticuerpo. Se introdujeron mutaciones en dieciocho posiciones dentro de cada CDR objetivo utilizando la estrategia de mutagénesis parsimoniosa. Posteriormente, se generaron bibliotecas de variantes scFv mediante el método de Kunkel. Tras varias rondas de selección, se analizaron las potenciales variantes con afinidad mejorada, evaluando sus secuencias de CDR y sustituciones de aminoácidos. Este enfoque permitió identificar ocho variantes que aumentaron la afinidad del anticuerpo. La variante más prometedora exhibió un valor IC50 de 38 nM y tenía dos sustituciones: Lys50 y Glu50, dentro del CDR-H2, que reflejaron un aumento de 28,14 veces en la afinidad de unión con respecto al anticuerpo original. Estos hallazgos brindan información valiosa sobre la ingeniería de anticuerpos y podrían contribuir al desarrollo de ensayos diagnósticos más sensibles y confiables para la tuberculosis.
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