Browsing by Author "Torres Vallejos, Eillen Romanet"
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Item Evaluación de procianidinas naturales y semi-sintéticas de cáscara de manzana (Malus domestica) sobre el efecto inhibitorio en la adherencia y actividad ureasa de Helicobacter pylori.(Universidad de Concepción, 2014) Torres Vallejos, Eillen Romanet; Pastene Navarrete, Edgar RafaelHelicobacter pylori infecta la mucosa gástrica de la mitad de la población mundial. Uno de sus principales factores de virulencia es la enzima ureasa, ésta es esencial en las primeras etapas de colonización gástrica porque neutraliza la acidez del estómago, permitiéndole su supervivencia. Compuestos polifenólicos de la cáscara de manzana (Malus domestica) no sólo actuarían como antioxidantes, sino que también podrían ejercer actividades antimicrobianas en diferentes porciones del tracto digestivo. Estos polifenoles de la cáscara de manzana podrían actuar contra H. pylori neutralizando algunos de sus factores de virulencia. Se identificó a las procianidinas como el subgrupo activo contra la ureasa. En este estudio, se evaluó el efecto anti-Helicobacter pylori de las fracciones de procianidinas naturales separadas por grado de polimerización y procianidinas semi-sintéticas, obtenidas por depolimerización a partir del extracto de cáscara de manzana (Malus domestica) de la variedad Granny Smith. El aislamiento de las procianidinas naturales y semi-sintéticas, se llevó a cabo mediante varias técnicas analíticas como la HSCCC y RP-HPLC para fraccionar procianidinas con diferente grado de polimerización y para obtener los aductos aislados producto de las depolimerizaciones. Las muestras se analizaron por técnica complementarias como HPTLC y espectrometría de masa. Con las fracciones y aductos de procianidinas se realizaron los ensayos sobre la actividad ureasa de H. pylori y ureasa control Jack bean, además, se probaron estas muestras sobre la adherencia de H. pylori y la inflamación promovida en células AGS. Se encontró que la actividad inhibitoria de las fracciones de procianidinas de la cascara de manzana (LMW, IMW y HMW) contra la ureasa Jack bean y ureasa de H. pylori, es dependiente del peso molecular, es decir, a mayor grado de polimerización de las fracciones de procianidinas existió un aumento en el porcentaje de inhibición contra la ureasa Jack bean y ureasa H. pylori, además, la inhibición es dependiente de la concentración y reversible. Estas fracciones se evaluaron, además, frente a la adherencia de H. pylori en células AGS, mostrando un patrón semejante de inhibición de la adherencia, y frente a la inflamación promovida en células AGS, evidenciaron una disminución en la producción de IL- 8. Los productos de la depolimerización de procianidinas (floroglucinol-aducto, benziltioeter-aducto y cisteamil-aducto), también se evaluaron frente a la ureasa de H. pylori y Jack bean, se encontró que cisteamil-aducto es el más potente de los 3, aun así, estos aductos inhiben la actividad ureasa en menor porcentaje que las fracciones naturales, pero también hay una dependencia a la concentración, y la inhibición es reversible. Frente a la adherencia en células AGS, el porcentaje de inhibición de esta adherencia es semejante a la inhibición de la ureasa. Los resultados obtenidos en este trabajo confirman la hipótesis de que la actividad inhibitoria de las procianidinas de cáscara de manzana contra Helicobacter pylori está asociada a su grado de polimerización y al tipo de sustitución en el carbono 4, lo que afecta su adherencia y actividad ureasa.Item Evaluación del efecto protector de procianidinas naturales y derivados semi-sintéticos frente a la infección por Helicobacter pylori,(Universidad de Concepción, 2017) Torres Vallejos, Eillen Romanet; García Cancino, Apolinaria del RosarioH. pylori es conocido porque infecta la mucosa gástrica humana de la mitad de la población mundial y se asocia directamente con patologías como gastritis, linfoma de MALT, ulcera péptica y cáncer gástrico. A pesar de que existe un tratamiento antibiótico con aceptables tasas de recuperación, la resistencia bacteriana va en aumento. Por este motivo es necesaria la búsqueda de nuevos tratamientos contra H. pylori. Actualmente se reconoce que productos naturales como las proantocianidinas (PACs) poseen efecto anti-H. pylori, ayudando a inhibir el efecto de ciertos factores de virulencia de H. pylori como la ureasa y anhidrasa carbónica (AC) las cuales están encargadas de neutralizar el entorno ácido del estómago, lo que permite su supervivencia. También estos compuestos han sido evaluados como potentes inhibidores de la adherencia bacteriana al epitelio gástrico. El objetivo de este estudio fue determinar el efecto de procianidinas naturales y sus derivados semi-sintéticos sobre factores de virulencia de H. pylori y estudiar si dichas moléculas ejercen un efecto protector frente a la infección in vitro. Estos derivados semi-sintéticos fueron preparados por ataque nucleofílico a partir de PACs naturales (cáscara de palta) con los agentes pirogalol y resorcinol. El aislamiento de las procianidinas naturales y sus derivados semi-sintéticos se llevó a cabo mediante cromatografía de partición centrífuga (CPC), las muestras obtenidas fueron identificadas por cromatografía en capa fina (TLC) y cromatografía líquido con espectrometría de masas (LC-MS). Con las muestras obtenidas se determinó la concentración mínima inhibitoria (CMI), concentración mínima bactericida (CMB) en medio líquido. La viabilidad bacteriana fue monitoreada a través de la cuantificación de los niveles de ATP. Posteriormente se realizaron ensayos sobre la actividad ureasa y AC de H. pylori. Finalmente se probaron estos PACs y aductos sobre la adherencia de H. pylori y la inflamación promovida en células AGS. Debido a la naturaleza polifenólica de PACs y aductos se evaluó su capacidad de eliminar la producción de especies reactivas del oxígeno (ERO) en neutrófilos estimulados por H. pylori. De todos los compuestos utilizados, el derivado de pirogalol presentó la menor CMI y logró comprometer tempranamente y en mayor grado la viabilidad bacteriana. Todos los compuestos mostraron ser buenos inhibidores de las enzimas ureasa y anhidrasa carbónica, siendo el derivado de pirogalol el que logró un mayor porcentaje de inhibición, en todos los casos se observó un efecto tiempo-dependiente. En los ensayos sobre células AGS se observó que los compuestos reducen significativamente la adherencia de H. pylori y la producción de IL-8. Además se encontró que estos compuestos lograron inhibir la producción de ERO en neutrófilos estimulados con H. pylori. En todos los ensayos nombrados se observó que el efecto de estos compuestos es concentración-dependiente.