Browsing by Author "Troncoso Toro, Ignacio Eduardo"

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    Comparación de la técnica inmunofluorescencia indirecta (IFI) con la prueba de RT-PCR desde leucocitos para la detección de animales infectados con el virus diarrea viral bovina.
    (Universidad de Concepción, 2007) Troncoso Toro, Ignacio Eduardo; Ortega Vásquez, René
    La importancia del diagnóstico del VDVB se debe a que causa grandes perdidas económicas en el ganado bovino, donde los leucocitos juegan un rol importante en la patogenia de la enfermedad y a su vez nos permiten identificar a los animales infectados. Debido a esto, en este trabajo utilizamos dos métodos de diagnóstico (IFI y RT-PCR) las cuales fueron estandarizadas previamente, para la detección del virus en 96 animales provenientes de lechería. Dentro de los resultados obtenidos 14/96 animales fueron positivos a RT-PCR, de los cuales 13 fueron positivos a IFI. Por otro lado, 10 animales fueron positivos a IFI pero negativos a RT-PCR y 72/96 animales fueron negativos a ambas técnicas. Los animales positivos a RT-PCR se remuestrearon 3 semanas después, para detectar animales PI mediante esta técnica, detectándose 2 de los 14 animales PI. Los resultados fueron organizados en una tabla de contingencia de 2x2, donde se obtuvo un valor Kappa de 0.63, que según la tabla se define como un nivel de concordancia bueno. Luego se contrastaron las hipótesis de este estudio, encontrándose que existe diferencia significativa entre ambas técnicas (p<0.05) en la detección del virus desde leucocitos. A su vez se demostró que el RT-PCR es útil para detectar a los animales persistentemente infectados (PI).
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    Distribución de garrapatas duras (acari: ixodoidea) y detección molecular de bacterias del género Borrelia, Ehrlichia y Rickettsia provenientes de diferentes ecorregiones de Chile
    (Universidad de Concepción, 2023) Troncoso Toro, Ignacio Eduardo
    Las enfermedades transmitidas por vectores (CVBD), y especialmente por garrapatas, han aumentado a un ritmo desconocido en los últimos años, generando repercusión en la salud pública y animal. En vista de la escasa información epidemiológica sobre la presencia de microorganismos en garrapatas duras en Chile, el objetivo general de esta propuesta fue evaluar la presencia de bacterias Ehrlichia, Borrelia y Rickettsia asociadas a garrapatas duras (Acari: Ixodoidea) provenientes de diferentes ecorregiones de Chile, para responder a la hipótesis que la presencia de bacterias de los géneros Ehrlichia, Borrelia y/o Rickettsia se asocia a zonas con mayor riqueza de garrapatas, esperando encontrar una mayor presencia de estas bacterias en las ecorregiones con climas templados y fríos en Chile. Para esto, se recolectaron 624 garrapatas provenientes de siete ecorregiones de Chile, las cuales se identificaron taxonómica y molecularmente usando un fragmento parcial (≈460-pb) del gen ARNr 16S mitocondrial. Luego, en cada garrapata, se buscó mediante técnicas moleculares la presencia de bacterias del género Borrelia (Spirochaetaceae), Rickettsia (Rickettsiaceae) y Ehrlichia Anaplasmataceae), empleando la reacción en cadena de la polimerasa convencional (PCR) con los genes flaB, gltA y ARNr 16S como screening, respectivamente, para luego amplificar los genes ospC, p66 e IGS para Borrelia, dsb y gltA para Ehrlichia, y ompA, ompB y htrA para Rickettsia. Del total de garrapatas, en 108 (18,68%) se obtuvo ADN de alguna de estas bacterias, siendo la presencia para los géneros Ehrlichia del 0,85%, Rickettsia del 17,5% y para Borrelia del 0,34%. Para Borrelia se efectuó confirmación de su identidad en dos garrapatas positivas (Ixodes abrocomae) utilizando los genes p66, IGS y ospC, los cuales, según BLAST, fueron 93% (611/657 pb), 84% (486/577 pb) y 78,4% (259/329 pb) idénticas a la secuencia de la genoespecie Borrelia chilensis VA1. En el caso de Rickettsia, del total de 103 muestras positivas al gen gltA empleado como screening, solo 10 muestras fueron secuenciadas (9,7%) obtenidas de Amblyomma tigrinum (80%) y de Rhipicephalus sanguineus (20%). Los haplotipos recuperados de A. tigrinum y R. sanguineus formaron un clado con secuencias de Candidatus Rickettsia andaenae obtenidas de Ixodes boliviensis (Perú), Amblyomma parvum (Brasil) y Amblyomma triste (Chile). En el caso de los genes htrA, ompA y ompB, según BLAST, fueron 100% idénticas a secuencias de Ca. R. andaenae obtenida de A. parvum en Brasil (KY402193; MK522488.1; KF030933.1). Para Ehrlichia, 12 ejemplares de tres especies de garrapatas (Ixodes uriae, Ixodes auritulus e Ixodes taglei) fueron positivas al gen ARNr 16S empleado como screening, de estas, 2 (16,6%) obtenidas desde I. uriae (1 ninfa, 1 hembra) fueron secuenciadas, donde la secuencia obtenida de la ninfa fue 100% (306 pb/306 pb) idéntica a Ehrlichia spp. aislada en estudios previos de I. uriae en Chile (MK049840.1). Mientras que, la otra secuencia fue 99% (331 pb/335 pb) idéntica a Candidatus Midichloria mitochondrii obtenida de Ixodes ricinus en Francia (KU559921.1). Para el gen dsb la secuencia fue 94% (209 pb/307 pb) idéntica a una secuencia de Ehrlichia spp. obtenida de bazo de pingüino magallánico (Spheniscus magellanicus) de la Isla Magdalena (MK049838.1), y para el gen gltA fue del 86% (526 pb/611 pb) idénticas a una secuencia de Ehrlichia muris obtenida de bazo de un roedor silvestre de Japón (CP006917). Respecto a la ocurrencia de ADN de bacterias a través de las ecorregiones analizadas, la mayor ocurrencia para bacterias se registró en Puna (85,7%), seguida de Coquimbo (33,5%), Maule (24%), Bosque Valdiviano (23%), Atacama (16,2%), Patagonia central (1,54%) y Santiago (0%), además se evidenció asociación entre la presencia de Rickettsia y Ehrlichia con las ecorregiones. En relación con las variables bioclimáticas, las variables seleccionadas mediante el análisis de componentes principales (PCA) fueron: la temperatura promedio anual (Bio 1), temperatura máxima del periodo más caliente (Bio 5), temperatura mínima del periodo más frio (Bio 6), precipitación anual, rango medio diurno (Bio 2), Precipitación anual (mm) (Bio 12) y Precipitación en el trimestre más caluroso (mm) (Bio 18). Mientras que, al análisis de regresión logística binaria para género de bacteria y de garrapata recolectada, solo se evidenció significancia estadística para el género Ixodes, para las variables Bio1, Bio2, Bio6 y Bio15 (Estacionalidad de la precipitación (Coeficiente de variación). Finalmente, al evaluar la correlación entre la riqueza de garrapatas y el gradiente latitudinal, se obtuvo una correlación baja y no significativa entre estas variables. En el presente estudio, se logró detectar ADN de bacterias del género Borrelia, Ehrlichia y Rickettsia en garrapatas Ixodidae, existiendo asociación estadística entre la mayor ocurrencia de bacterias en las ecorregiones de la zona norte que en la sur.
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