Browsing by Author "Villaseca Herrera, Soraya Constanza"

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    Estudio de la Función de Gαi2 sobre la Polaridad Celular y Dinámica de los Microtúbulos Durante la Migración Colectiva en Células de la Cresta Neural Craneal de Xenopus.
    (Universidad de Concepción, 2023) Villaseca Herrera, Soraya Constanza; Torrejón Quezada, Marcela Eliana
    The microtubule dynamics is essential for the maintenance of cell polarity during migration. They are involved in the trafficking and destination of the required proteins to establish a correct antero-posterior polarity. Neverthless, changes in the stability of microtubules could contribute to the loss of this polarity, the disruption of the focal adhesion disassembly, severe changes in actin polymerization level, in summary to affect collective cell migration. Previous analyzes in our laboratory have shown that the heterotrimeric G protein, specifically Gαi2, regulates the Cranial Neural Crest (CNC) cells migration. The loss of function of Gαi2 inhibits the migration of these cells and promote the misslocalization of polarity proteins such as Par3 and ζPKC, results supported by other studies in immune system where the loss of function of Gαi2 also inhibits the migration of macrophages and T lymphocytes towards the inflammation sites. Addicionally, studies in C. elegans have described that Gαi2 control de microtubules pulling forces to orientate the spindle correctly during asymmetric cell division. Therefore, in order to investigate the functional mechanism of the Gαi2 subunit during cell migration, and its possible contribution to regulating microtubules dynamics and cell polarity, in this thesis we investigated the role of the Gαi2 subunit of the heterotrimeric G protein in the CNC cells, an embryonic population that extensively and collectively migrates throughout the embryo, in order to generate other tissues. Our results have shown that Gαi2 is localized throughout the cell, but in the cell cortex it is localized close to the microtubules network, possibly controlling microtubules dynamics. The Gαi2 expression was reduced through a specific morpholino, that strongly reduced the depolymerization of the microtubules, increasing their stability, affecting the actin polymerization increasing the protrusions size and the focal adhesions area. Also, Gαi2 loss of function resulted in an increase of the Rac1 activity in the free edge and in the cell-cell contact, a changing in the location of RhoA towards the leading edge, which in conclusion affect CNC migration. These effects were restored by low concentrations of nocodazole treatment, as microtubule depolymerizing drug, but partially rescued by Rac1 inhibition. In addition, we found that Gαi2 interacts with EB1, EB3, tubulin, α5-integrin and ζPKC, as shown by co-immunoprecipitation, supporting a critical role for Gαi2 in microtubule dynamics, focal adhesions disassembly and cell polarity. Therefore, our results together, allow us to propose to Gαi2 as a master regulator of, cell polarity, morphology and cell-matrix adhesion dynamics, through the control of microtubule dynamics, contributing to the crosstalk between both cytoskeletons (actin and tubulin), thus allowing the correct collective migration of CNC cells.
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    Estudio de la función de las proteínas Gαi2 y Ric-8A en la morfología y polarización celular durante la migración de células de la cresta neural craneal en xenopus.
    (Universidad de Concepción, 2017) Villaseca Herrera, Soraya Constanza; Torrejón Quezada, Marcela Eliana
    La cresta neural (NC) es una población de células embrionarias transitoria inducida en el borde de la placa neural que migra extensivamente para diferenciarse en otros tejidos durante el desarrollo. Se ha demostrado que Ric-8A, un GEF para la subunidad Gα de la proteína G heterotrimérica estaría regulando la migración de las células de Cresta Neural Craneal (CNC) en Xenopus. Por otro lado también se ha descrito que la proteína G heterotrimérica, a través de su subunidad Gα, estaría participando en procesos de migración en varios tipos celulares, pero sería específicamente la subunidad Gαi2 la que estaría controlando la distribución y quimiotaxia en distintos tipos celulares derivados del sistema inmune. Es por esta razón que en esta tesis se estudió la relación entre Gαi2 y Ric-8A en el mecanismo que controla la migración de las células de CNC. Para ello se evaluó el efecto de la pérdida y ganancia de función de Gαi2 y el rescate del fenotipo morfante para Ric-8A sobre la migración de las células de CNC in vivo e in vitro, donde se encontró que ambas proteínas estarían participando en la misma vía de señalización. Por otro lado también se encontró que Ric-8A y Gαi2 estarían colocalizando en el borde director de las células migratorias y además se encontrarían interaccionando o al menos formando parte de un complejo de interacción. Asimismo, las células morfantes para Ric-8A y Gαi2 presentaron cambios en la morfología celular, principalmente a nivel de la distribución del citoesqueleto de actina, la longitud de las protrusiones, y tubulina. Las células morfantes para Ric-8A presentaron además problemas a nivel de las adhesiones focales, siendo estas de menor número y área. Por otro lado las células morfantes para Gαi2 presentaron adhesiones focales de mayor longitud, en comparación a las células controles, además de defectos en la polaridad celular colectiva mediada por Rac1 y Par3. Estos resultados sugieren que Ric-8A, a través de la vía Gαi2, estaría controlando la migración de las células de CNC a través de la organización polarizada del citoesqueleto y dinámica de adhesiones focales.
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