Implementación de una plataforma analítica HPTLC-bioensayo-MS de efecto dirigido para la identificación de compuestos bioactivos en chirimoya (Annona cherimola Mill.).
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Date
2019
Authors
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Publisher
Universidad de Concepción.
Abstract
El chirimoyo/a (Annona cherimola Mill.) es un árbol pequeño cultivado en diferentes países
incluido Chile. Este árbol produce un fruto conocido como chirimoya que ha sido largamente
utilizado en medicina tradicional. Algunas actividades biológicas beneficiosas para la salud
humana han sido demostradas mediante ensayos in vitro, sin embargo son pocos los
estudios que individualizan los compuestos que ejercen la bioactividad. El estudio de los
componentes bioactivos de la chirimoya permitiría descubrir moléculas con potencial
terapéutico para enfermedades crónicas no transmisibles, otorgando de esta manera un
valor agregado a la fruta y subproductos generados. Para la determinación de compuestos
bioactivos fue desarrollada e implementada una plataforma analítica HPTLC-bioensayo-MS
de efecto dirigido que permite la determinación e identificación in situ de compuestos
bioactivos mediante un flujo de trabajo simple y directo, que permite un screening general
de la composición de piel, pulpa y semilla de chirimoya. El uso de esta herramienta analítica,
permitió detectar en la piel de chirimoya tres compuestos con actividad inhibitoria sobre la
enzima acetilcolinesterasa, que luego fueron analizados mediante HPTLC-MS y UHPLCDAD-MS/MS. Los compuestos fueron identificados como anonaina, glaucina, y un tercer
candidato como xilopina, siendo por primera vez reportada la capacidad inhibitoria de estos
alcaloides. Aplicando el mismo sistema, tres fenolamidas presentes en piel y semilla fueron
detectadas e identificadas como inhibidores de a-glucosidasa, las cuales corresponden a
N-trans-feruloil tiramina, N-trans-p-coumaroil tiramina y N-trans-feruloil fenetilamina, siendo
primera vez que se reporta esta bioactividad así como la presencia de este último en
chirimoya. Los compuestos antioxidantes presentes en extracto de piel y semilla fueron
detectados vía ensayo HPTLC-DPPH, y la capacidad antioxidante fue cuantificada a partir
del mismo ensayo mediante procesamiento de imagen digital usando el software ImageJ.
Los compuestos que presentaron una mayor actividad, expresada como equivalentes de
ácido cafeico, fueron estudiados directamente mediante un análisis TLC-MS y clasificados
preliminarmente como como acetogeninas y fenolamidas. De esta manera, el ensayo
HPTLC-DPPH-MS resultó en una metodología completa que permite detectar, cuantificar e
identificar compuestos antioxidantes, estableciendo la aplicabilidad del procesamiento de
imagen digital sobre otras metodologías HPTLC-bioensayo.
El trabajo realizado logró establecer también un extracto de piel de chirimoya con destacada
actividad inhibitoria de AChE, a-glucosada y capacidad antioxidante, obtenido mediante una metodología optimizada de extracción por fluidos supercríticos. La presencia de
algunos de los compuestos, caracterizados en la plataforma analítica, fue cuantificada
mediante un análisis UHPLC-ESI-MS. Adicionalmente, hojas de diferentes variedades de
chirimoya fueron evaluados con la misma metodología, estableciendo su potencial como
fuente de alcaloides inhibidores de AChE. En resumen, la aplicación de la plataforma
analítica permitió evaluar el potencial de sub-productos de la agroindustrial, piel y semilla,
como fuente de compuestos bioactivos con potencial terapéutico.
Description
Tesis para optar al grado de Doctor en Ciencias y Tecnología Analítica.
Keywords
Compuestos Bioactivos de Plantas, Chirimoyas, Antioxidantes, PRODUCCIÓN Y CONSUMO RESPONSABLE