Browsing by Author "Geisse Lema, Julieta Soledad"
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Item Estudio de transferencia horizontal de genes de resistencia a florfenicol y tetraciclina desde bacterias aisladas de cultivos larvales de ostión del norte (Argopecten purpuratus) a bacterias patógenas para estas larvas.(Universidad de Concepción., 2010) Geisse Lema, Julieta Soledad; González Rocha, Gerardo EnriqueDesde hace aproximadamente medio siglo se tiene conocimiento sobre el fenómeno de resistencia a los antibióticos, tiempo que casi coincide con el período en que los antibióticos se comenzaron a utilizar. En diversas áreas de la actividad humana, como en medicina humana y veterinaria, agronomía, piscicultura y acuicultura, se han empleado a los agentes antibacterianos para el control de bacterias patógenas. Sin embargo, en la producción animal a gran escala, también han sido utilizados como promotores de crecimiento y en la profilaxis de infecciones. Por otra parte, las bacterias han desarrollado estrategias para sortear la acción de los antibióticos, tanto de los producidos naturalmente como de los sintéticos. Así, el uso y abuso de estos compuestos ha conducido a la selección de bacterias resistentes debido a diferentes mecanismos, con algunos codificados en genes que pueden ser transferidos a bacterias no resistentes por el mecanismo llamado transferencia horizontal de genes. La transferencia horizontal es el proceso por el cual los organismos pueden adquirir genes de otros organismos en su ambiente. Los genes se pueden transmitir entre los miembros de la misma o de diferentes especies presentes en la comunidad microbiana. En los sistemas de cultivo y en el área circundante, hay bacterias tanto inocuas como patógenas que interactúan con los organismos en cultivo o en producción; en ambas áreas se ha encontrado resistencia a antibacterianos como resultado de la presión ejercida por los tratamientos empleados en la producción. Por lo tanto, es importante el estudio de genes de resistencia a antibióticos en bacterias que interactúan con organismos para el consumo humano y proveniente de la producción a gran escala, como Argopecten purpuratus, y conocer si estos genes pueden ser transferidos a bacterias que son patógenas para las larvas. Florfenicol y oxitetraciclina son entre los más ampliamente utilizados en acuicultura. Así, se plantea que: En la producción intensiva de Argopecten purpuratus, bacterias resistentes a florfenicol y tetraciclina, aisladas de muestras de agua de tanques de cultivo de A. purpuratus, transfieren, por conjugación, genes de resistencia a florfenicol y tetraciclina a bacterias susceptibles patógenas para larvas. Así que el objetivo de este estudio, fue evaluar la capacidad de transferencia de genes que confieran resistencia a agentes antibacterianos, presentes en bacterias aisladas de cultivo de ostiones, hacia bacterias patógenas. Se trabajó con 94 cepas bacterianas aisladas desde muestras de agua de cultivo de larvas de ostiones en el Laboratorio de Cultivo Marino de la Universidad Católica del Norte (Chile). La susceptibilidad a agentes antibacterianos de diferentes grupos se ensayó por el método de difusión en agar. Diez aislados se seleccionaron como donadoras para los experimentos de conjugación y las cepas Escherichia coli K-12, y la patógena para las larvas Vibrio splendidus UC 258 y UC 259 se utilizaron como receptoras. Los estudios de transferencia se condujeron por conjugación en medio líquido. La subsiguiente identificación de transconjugantes fue realizada por estudio de propiedades bioquímicas y la detección de genes de resistencia al florfenicol y tetraciclina, se realizó por la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Las experiencias de conjugación en medio líquido mostraron que dos aislados de Pseudomonas monteilii fueron capaces de transferir la resistencia a tetraciclina y florfenicol a las cepas patógenas recipientes asociadas a acuicultura como se observó fenotípicamente. Es más, los perfiles de resistencia de las transconjugantes evidenciaron la co-transferencia de resistencia a los diferentes antibióticos. Aunque los resultados mostraron el flujo de genes de resistencia a tetraciclina y florfenicol, ellos no se detectaron por PCR, probablemente debido a problemas de estandarización en el proceso. Sería valioso realizar estudios de transferencia por transformación, desde que éste también es un mecanismo importante en el reclutamiento de genes de resistencia a los diversos antibióticos. Finalmente, los resultados de este y otros estudios, sugieren que el intercambio genético entre bacterias nativas y patógenas es importante en la producción de larvas de ostión, y que este intercambio de genes de resistencia a antibióticos hacia los patógenos, bien pueda permitir la selección de bacterias resistentes a florfenicol y tetraciclina, e incluso multiresistentes, causando un problema serio además en los tratamientos utilizados en acuicultura y el riesgo de grandes pérdidas económicas en la producción intensiva de A. purpuratus por episodios epizoóticos.Item Plásmidos relacionados a blaKPC en cepas de enterobacterias chilenas productoras de carbapenemasas.(Universidad de Concepción., 2017) Geisse Lema, Julieta Soledad; Domínguez Yévenes, MaríanaKlebsiella pneumoniae es uno de los bacilos Gram negativos resistentes a antibióticos más frecuentemente aislados de infecciones asociadas a atención en salud en Chile. A nivel mundial, la mayor morbimortalidad se presenta con las cepas que sintetizan carbapenemasas que inactivan los antibacterianos utilizados como última línea de tratamiento. Desde la primera detección de un aislado de K. pneumoniae productor de la carbapenemasa KPC, en 1996 en Carolina del Norte, la distribución geográfica de esta enzima y su hospedador se ha ampliado de forma alarmante. En Chile no se había informado casos de infecciones por enterobacterias productoras de esta carbapenemasa hasta marzo del año 2012, cuando se aisló una cepa de K. pneumoniae en un paciente proveniente de Italia. Posteriormente, se comienza a informar aislamientos autóctonos de diversas especies de la familia Enterobacteriaceae productores de KPC-2. Hasta el momento no se dispone de información sobre los plásmidos en donde se encuentra el gen codificante de la enzima KPC-2 en las cepas aisladas en Chile. Por lo tanto, el objetivo de esta tesis fue identificar y determinar el grupo de incompatibilidad de los plásmidos en los cuales está localizado el gen blaKPC-2 en las primeras cepas de enterobacterias aisladas en hospitales chilenos. Se trabajó con 8 cepas de enterobacterias productoras de KPC-2, aisladas en diferentes centros hospitalarios entre los años 2012 y 2014, proporcionadas por el Instituto de Salud Pública de Chile. Las cepas fueron seleccionadas de acuerdo a la especie bacteriana (K. pneumoniae, Klebsiella oxytoca, Escherichia coli, Enterobacter cloacae, Serratia marcescens) y las 4 cepas de K. pneumoniae de acuerdo al secuenciotipo y ambiente genético en que se encuentra el gen blaKPC-2. En primer lugar, empleando ADN total se realizó un screening de los grupos de incompatibilidad de los plásmidos contenidos en cada cepa mediante el método de tipificación de replicón basado en PCR. Luego se extrajo el ADN plasmídico con el kit comercial DNA Zyppy Plasmid Miniprep® y el plásmido portador del gen blaKPC-2 fue investigado por el método de transferencia alcalina e hibridación por Southern blot. Las bandas plasmídicas que hibridaron con la sonda marcada fueron cortadas desde el gel de agarosa para obtener el ADN correspondiente. La presencia del gen blaKPC-2 fue verificada por PCR y luego se detectó el grupo de incompatibilidad de los plásmidos. Los productos de PCR del análisis de los grupos de incompatibilidad fueron enviados a secuenciar a MacroGen, Korea. Se encontró que 7 de los 8 aislados presentaron más de un tipo de plásmido y la mayor diversidad de plásmidos fue encontrada en la cepa de E. coli UC327 (IncFIB, IncA/C, IncN e IncY). Mediante Southern blot se estableció que el gen blaKPC-2 está localizado en un plásmido de tamaño 146 Kb, perteneciente al grupo de incompatibilidad IncF en las cepas de E. coli UC327, K. pneumoniae UC338 y E. cloacae UC347 y, específicamente, de la variante IncFIB en E. coli y E. cloacae. El plásmido que porta blaKPC-2 en la cepa K. oxytoca se pudo aislar, y correspondió a un plásmido no tipificable. Se destaca que el plásmido de la cepa E. coli presenta dos sistemas de replicación, IncFIB e IncN, es decir, es un plásmido de la categoría multireplicón. Las secuencias de los replicones de los grupos de incompatibilidad IncFIB de las cepas de E. coli y E. cloacae, evidenciando la misma identidad en cepas de diferentes especies. Se concluye que el gen blaKPC-2 se localiza, principalmente, en variantes de plásmidos del grupo de incompatibilidad F de un tamaño de ca. 146 Kb, en cepas de enterobacterias correspondientes a los primeros casos detectados en Chile. Esta tesis aporta con la primera información, aunque limitada, de la identidad de plásmidos portadores del gen que codifica para la carbapenemasa KPC-2 en cepas chilenas de enterobacterias.