Influencia de la rigidez de matrices de colágeno en la fluidez de la membrana celular.
Loading...
Date
2020
Authors
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Universidad de Concepción.
Abstract
En el presente trabajo se buscó ampliar el conocimiento con respecto al efecto
de la rigidez del medio extracelular sobre la fluidez de la membrana celular.
Para ello se utilizaron matrices de colágeno de rigidez variable y se midió la
fluidez de las membranas celular de la línea celular NIH 3T3 crecidas sobre
y dentro de las matrices.
Se fabricaron a partir de colágeno tipo I de cola de rata (5 mg/mL) matrices
de colágeno de concentraciones 0,5; 1; 2 y 4 mg/mL y se gelificaron durante
1 y 3 días. Se determinó la rigidez de las matrices mediante reología, la forma
y diámetro de sus fibras mediante microscopia electrónica de barrido (SEM)
y se obtuvo la fracción de volumen ocupado por las fibras mediante
microscopía de segunda harmónica (SHG). Se cultivaron fibroblastos NIH
3T3 sobre y dentro de colágeno durante 1 y 3 días. Para la medición de su
fluidez de membrana se marcó las células con la sonda fluorescente
LAURDAN (6-dodecanoil-2-dimetilaminonaftaleno) y se determinó su
función polarización generalizada (GP) utilizando imágenes obtenidas por
microscopia de fluorescencia de dos fotones. Finalmente, para comprobar la
biocompatibilidad del colágeno con las células se utilizaron las sondas
fluorescentes Sytox Orange y RedNuc para determinar el porcentaje de
viabilidad celular.
Los resultados mostraron que a mayor concentración de colágeno aumenta la
rigidez de la matriz y disminuye el volumen libre para el crecimiento de las
células. Esta rigidez afecta de mayor manera a las membranas de las células
que se cultivaron sobre colágeno las cuales mostraron un aumento es su
fluidez luego de tres días de cultivo. Por otro lado, las células que se
cultivaron dentro de colágeno muestran una fluidez independiente de la
concentración de colágeno del medio que las rodea. Y al pasar más tiempo
en cultivo hay una diminución en su fluidez, lo cual puede indicar una mayor
adherencia a la matriz.
Description
Tesis para optar al título de Magíster en Ciencias Químicas.
Keywords
Colágeno, Membrana Celular, Fluidez de la Membrana