Modulación de la comunicación Embrio-Materna en Bovinos, mediante mecanismos alternativos y complementarios a Interferon Tau

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dc.contributor.advisorRodríguez Álvarez, Lleretnyes
dc.contributor.authorAguilera González, Constanza Javieraes
dc.date.accessioned2025-06-16T19:30:40Z
dc.date.available2025-06-16T19:30:40Z
dc.date.issued2023es
dc.descriptionTesis presentada para optar al grado de Doctora en Ciencias Veterinariases
dc.description.abstractLa comunicación embrio-materna se establece desde los primeros estadios del desarrollo embrionario y es esencial para la implantación. En bovinos, la molécula clave para el reconocimiento de la gestación es interferón tau (IFNT), la cual es secretada por el conceptus al día 16 de la gestación. Sin embargo, se ha determinado que el embrión en estadio de blastocisto es capaz de producir IFNT. Por otra parte, el embrión es capaz de secretar vesículas extracelulares (EVs) las cuales, se ha descubierto recientemente, juegan un papel importante en la comunicación que establece el embrión con el endometrio. Esto debido a que las EVs son nano partículas que poseen como cargo moléculas con actividad biológica. Recientemente, se ha determinado que el embrión en estadios tempranos de desarrollo, es capaz de inducir una respuesta diferente en las células endometriales epiteliales (bEECs) a través de sus EVs según el tipo de producción embrionaria (in vivo, in vitro). Asimismo, se demostró que las EVs maternas, también presentan diferencias en su cargo al ser obtenidas mediante cultivo de celular (producción in vitro) en comparación a su obtención bajo condiciones in vivo. El objetivo de este trabajo fue determinar, si las condiciones de producción in vitro Modifican la comunicación embrio-materna establecida a través de las EVs. Para ello se buscó primero determinar, si las EVs secretadas por embriones bovinos producidos in vivo e in vitro durante el periodo pre-implantatorio inducen modificaciones transcriptomicas, activando la señalización de IFNT en las bEECs. Para ello, se evaluó si durante el desarrollo embrionario temprano (blastulación, días 5-7 de desarrollo), las EVs de los embriones producidos in vitro (EVs-IVP) e in vivo (EVs-IVV), inducían una respuesta diferente a nivel transcriptómico en las bEECs. Junto con ello, se buscó determinar el efecto de las EVs provenientes de embriones en estadio más avanzado de desarrollo (día 7-9) producidos tanto in vitro como in vivo, en la expresión genes vinculados a función endometrial y señalización de IFNT en las bEECs. Parte del objetivo de este trabajo fue también determinar el efecto del sistema de producción in vitro en las EVs provenientes de células endometriales. Para ello, se evaluó el efecto de EVs provenientes de fluido uterino (EV-UF) y de cultivo celular (EVC) en el desarrollo pre-implantatorio (Día 5-9 de desarrollo) de embriones bovinos producidos in vitro. Para obtener las EVs embrionarias del periodo de blastulación (5-7 de desarrollo), mórulas bovinas producidas in vitro e in vivo fueron cultivadas individualmente por 48 horas para posteriormente aislar desde el medio de cultivo las EVs embrionarias. Una vez obtenidas, las EVs fueron teñidas con PKH67 y añadidas al medio de cultivo de bEECs para evaluar su internalización. Posteriormente se evaluó el perfil transcriptomico de las bEECs mediante secuenciación del ARN mensajero. Tanto las EVs-IVV como las EVs-IVP indujeron la expresión de genes clásicos y no clásicos inducidos por interferón (ISGs) y otras vías de señalización vinculadas a función endometrial en bEECs. Un número mayor de genes diferencialmente expresados fueron inducidos por EVs-IVP (3552) en comparación a las EVs-IVV (1838). En el análisis de ontología de genes, se demostró que las EVs-IVP/IVV inducen una regulación a la alza de la vía de señalización extracelular de exosomas, respuesta de las células ante estímulos y procesos de modificación de proteínas. Respecto al efecto en las bEECs de las EVs-IVP/IVV provenientes de embriones de día 7-9 de desarrollo, blastocistos expandidos fueron cultivados individualmente por 48 horas para el aislamiento de sus EVs. Posteriormente se evaluó la internalización de las EVs embrionarias por parte de las bEECs para luego determinar la expresión génica mediante RT-qPCR. Se determinó que los genes no clásicos inducidos por IFNT lograron ser activados en las bEECs únicamente por las EVs-IVP. Por último, en relación al efecto de las EVs provenientes de EVC y EV-UF en el desarrollo embrionario, las EVC lograron inducir una activación de genes viculados a pluripotecia, mientras que las EV- UF indujeron una mayor expresión de IFNT por parte de los embriones bovinos además de un incremento sostenido durante el desarrollo del diámetro y tendencia a mayor cantidad de blastocistos expandidos y protruidos.es
dc.description.abstractEmbryo-maternal communication is established from the first stages of embryonic development and is essential for implantation. In bovines, the key molecule for pregnancy recognition is interferon tau (IFNT), which is secreted by the conceptus on day 16 of gestation. However, it has been determined that the blastocyst stage embryois capable of producing IFNT. On the other hand, the embryo is capable of secreting extracellular vesicles (EVs) which, recently discovered, play an important role in the communication that the embryo establishes with the endometrium. This is because EVs are nanoparticles that have molecules with biological activity as charge. Recently, it has been determined that the embryo in early stages of development is capable of inducing a different response in endometrial epithelial cells (bEECs) through its EVs depending on the type of embryonic production (in vivo, in vitro). Likewise, it was shown that maternal EVs also present differences in their charge when obtained by cell culture (in vitro production) compared to their obtaining under in vivo conditions. The objective of this work was to determine if the in vitro production conditions could modify the embryomaternal communication established through the EVs. To do this, we first sought to determine if the EVs secreted by bovine embryos produced in vivo and in vitro during the pre-implantation period were able to induce transcriptomic modifications, activating IFNT signaling in bEECs. For this, it was evaluated whether during early embryonic development (blastulation, days 5-7 of development), the EVs of the embryos produced in vitro (EVs-IVP) and in vivo (EVs-IVV), induced a different response at the level of the embryo. transcriptomic in the bEECs. Along with this, we sought to determine the effect of EVs from embryos in a more advanced stage of development (day 7-9) produced both in vitro and in vivo, on the expression of genes linked to endometrial function and IFNT signaling in bEECs. Part of the objective of this work was also to determine the effect of the in vitro production system on EVs from endometrial cells. For this, the effect of EVs from uterine fluid (EV-UF) and cell culture (EVC) on pre-implantation development (Day 5-9 of development) of bovine embryos produced in vitro was evaluated. To obtain the embryonic EVs from the blastulation period (5-7 years of development), bovine morulae produced in vitro and in vivo were cultured individually for 48 hours to later isolate the embryonic EVs from the culture medium. Once obtained, the EVs were stained with PKH67 and added to the bEECs culture medium to assess their internalization. Subsequently, the transcriptomic profile of the bEECs was evaluated by messenger RNA sequencing. Both EVs-IVV and EVs-IVP induced the expression of interferon-induced classical and non-classical genes (ISGs) and other signaling pathways linked to endometrial function in bEECs. A greater number of differentially expressed genes were induced by EVs-IVP (3552) compared to EVs-IVV (1838). In gene ontology analysis, it was shown that EVs-IVP/IVV induce an upregulation of the exosome extracellular signaling pathway, cell response to stimuli, and protein modification processes. Regarding the effect on the bEECs of the EVsIVP/IVV from embryos on day 7-9 of development, expanded blastocysts were cultured individually for 48 hours for the isolation of their EVs. Subsequently, he evaluated the internalization of the embryonic EVs by the bEECs to later evaluate gene expression by RT-qPCR. It was determined that non-classical genes induced by IFNT were able to be activated in bEECs only by EVs-IVP. Finally, in relation to the effect of the EVs from EVC and EV-UF on embryonic development, the EVCs managed to induce an activation of genes linked to pluripotency, while the EV-UF induced a greater expression of IFNT by the bovine embryos, in addition to a sustained increase in diameter during development and a tendency to a greater number of expanded and protruded blastocysts.en
dc.description.campusChillánes
dc.description.departamentoDepartamento de Ciencia Animales
dc.description.facultadFacultad de Ciencias Veterinariases
dc.description.sponsorshipFONDECYT REGULAR/1210334 ANID/21201060
dc.identifier.urihttps://repositorio.udec.cl/handle/11594/12718
dc.language.isoeses
dc.publisherUniversidad de Concepciónes
dc.rightsCC BY-NC-ND 4.0 DEED Attribution-NonCommercial-NoDerivs 4.0 Internationalen
dc.rights.urihttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
dc.subjectFecundación in vitro - Veterinariaes
dc.subjectBovinoses
dc.titleModulación de la comunicación Embrio-Materna en Bovinos, mediante mecanismos alternativos y complementarios a Interferon Taues
dc.typeThesisen

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