Influencia de factores de transcripción y de secuencias de ADN sobre la remodelación de cromatina dependiente de ATP
Loading...
Date
2013
Authors
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Universidad de Concepción.
Abstract
En eucariontes el ADN nuclear se encuentra a la forma de un complejo
multiproteico denominado cromatina, cuya unidad básica es el nucleosoma. La unión de
factores de transcripción y la ARN polimerasa a promotores de genes determina la
actividad transcripcional. Estos elementos se distribuyen de manera modular en las regiones
promotoras de genes y esta distribución es de gran importancia para su correcta acción. En
este contexto, la accesibilidad de las proteínas regulatorias puede ser modulado por la
distribución de nucleosomas en las regiones regulatorias de un gen. El estado de
compactación de la cromatina puede ser alterado por complejos remodeladores de
cromatina ATP-dependientes (Ej SWI/SNF, RSC), y varios factores de transcripción
pueden reclutar estos complejos hacia regiones regulatorias, llevando la acción
remodeladora a puntos específicos del genoma.
Si bien en el presente existe evidencia, que apunta a la influencia que secuencias de
ADN pueden tener sobre la actividad remodeladora dependiente de ATP, los mecanismos
involucrados no se conocen con profundidad . Actualmente, se desconoce si la variación de
distancia y la presencia de ADN-Z (una de las conformaciones que puede adoptar el ADN)
entre el sitio de unión de uno de estos factores de transcripción y un nucleosoma podría
influenciar la actividad remodeladora de la maquinaria ATP-dependiente. Con el objeto de
abordar esta problemática se realizaron ensayos de remodelación in vitro usando diferentes
probadores mononucleosomales, variando la distancia entre el sitio de unión del factor de
transcripción Gal4 y un nucleosoma. Para el caso del ADN-Z utilizamos secuencias con
tendencia a adoptar la conformación Z entre el nucleosoma y el sitio de unión para el factor
de transcripción Gal4. El efecto de estos dos factores fue evaluado en presencia del
complejo SWI/SNF de levadura y el factor de transcripción quimérico Gal4-VP16.
Bajo nuestras condiciones de ensayo, SWI/SNF tuvo un requerimiento absoluto de
Gal4-VP16 para poder asociarse al probador mononucleosomal. Nuestros resultados
muestran que el desensamblaje nucleosomal fue mayor cuando la distancia entre el
nucleosoma y el sitio de unión de Gal4 fue menor. También observamos que la extensión
del ADN extranucleosomal influye en la fuerza de unión de SWI/SNF a los nucleosomas.
Respecto al ADN-Z, nuestros resultados muestran que el desensamblaje de nucleosomas es
mayor en presencia de secuencias con tendencia a adoptar la conformación Z, comparado
con secuencias normales. Nuestros resultados apuntan a nuevos aspectos que podrían tener
un impacto sobre la expresión génica en el nivel de regulación transcripcional.
Description
Tesis (Magister en Bioquímica y Bioinformática)
2013
2013
Keywords
Transcripción Genética, Regulación Genética, ADN Polimerasas, Cromatina, Adenosina Trifosfatasa, Secuencia de Aminoacidos