Clonamiento, expresión y caracterización funcional de Reductasas de Ácido Deshidroascórbico en Células HEK-293 = cloning, expression and functional characterization of dehydroascorbic acid reductase en HEK-293 cells.
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Date
2011
Authors
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Publisher
Universidad de Concepción.
Abstract
La vitamina C es un nutriente esencial para el normal funcionamiento de los
sistemas fisiológicos, participa como antioxidante y cofactor enzimático. Puede
encontrarse biológicamente activa en solución en la forma reducida (ácido ascórbico, AA)
u oxidada (ácido deshidroascórbico, DHA). Las células de mamíferos son capaces de
transportar el ácido ascórbico a través de cotransportadores de sodio ascorbato (SVCTs) y
el ácido deshidrascórbico a través de transportadores facilitativos de glucosa (GLUTs). La
vitamina C en el organismo se encuentra fundamentalmente en la forma reducida, dado a
que el DHA que se genera en reacciones redox se reduce inmediatamente a ácido ascórbico
intracelularmente, por un proceso de reciclaje y acumulación, con participación de DHA
reductasas. Sin embargo, se desconoce el papel específico de cada una de las reductasas en
la acumulación intracelular de elevadas concentraciones de ácido ascórbico. En esta
dirección postulamos que las reductasas de ácidos deshidroascórbico glutaredoxinas y
aldocetoreductasas son las responsables de la acumulación y reciclaje de la vitamina C.
Para establecer este punto, nos hemos propuesto clonar DHA reductasas desde las células
de origen humano; las enzimas aldoceto reductasa 1C3 (AKR1C3) la cual es NADPH
dependiente, glutaredoxina 1 (Grx1) y glutaredoxina 2a (Grx2a) ambas dependientes del
Glutatión. Una vez clonadas se construirán quimeras reductasa-proteína verde fluorescente
para establecer su localización subcelular en células transfectadas, realizando ensayos y
estudios de su papel en la acumulación, reciclaje y retención celular de vitamina C.
Description
Tesis para optar al grado de Magister en Bioquímica y Bioinformática
Keywords
Vitamina C, Ácido Desidroascórbico, Transporte Biológico