Inhibición de GLUT2 en tanicitos hipotalámicos in vivo y su efecto sobre la ingesta alimenticia.
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Date
2013
Authors
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Publisher
Universidad de Concepción.
Abstract
El transportador de glucosa 2 (GLUT2) es considerado un componente central en el
mecanismo sensor de glucosa periférico, fundamentalmente en el páncreas. Un
sistema sensor similar ha sido recientemente propuesto a nivel del SNC
específicamente en el hipotálamo. Debido a lo cual es fundamental generar
herramientas que permitan el estudio del mecanismo sensor de glucosa
hipotalámico. Es así que nuestra hipótesis de trabajo propone que la inhibición de
GLUT2 en tanicitos provoca una alteración en la conducta alimenticia. Con el fin de
obtener herramientas moleculares que nos permitan evaluar las consecuencias
funcionales del silenciamiento de GLUT2, se generó un vector adenoviral que induce
una disminución de la expresión de GLUT2 a través de un shRNA. Se evaluó el
efecto de la transducción adenoviral sobre la expresión de GLUT2 en la línea celular
de insulinoma de rata y en cultivo primario de tanicitos a través de qRT-PCR y
Western blot. En ambos casos se obtuvo una inhibición significativa que superó el
50%, lo que demostró la capacidad inhibitoria del adenovirus generado.
Posteriormente, con el fin de demostrar el efecto de la inhibición de GLUT2 sobre el
comportamiento alimenticio inyectamos el adenovirus en el tercer ventrículo
mediante estereotaxia. Realizamos dos ciclos de ayuno-realimentación,
monitoreando el alimento ingerido durante las primeras 12h de realimentación. En el
primer ciclo los animales knock down comen un 75% mas que los animales controles
y durante el segundo ciclo esta diferencia aumenta un 100%. Además, paralelo a
estos estudios determinamos, mediante un sistema de monitoreo en tiempo real, el
establecimiento del tiempo de saciedad en los animales al comenzar el periodo de
realimentación. En el primer ciclo los animales knock down para GLUT2 aumentan
el tiempo para establecer la saciedad en un 70% y un 65% durante el segundo ciclo.
Estos resultados demuestran que GLUT2 expresado en tanicitos hipotalámicos
estaría cumpliendo un papel importante en el comportamiento alimenticio de ratas,
afectando la respuesta de saciedad en las ratas y por lo tanto aumentando su
ingesta alimenticia.
Description
Tesis para optar al grado de Magister en Bioquímica y Bioinformática
Keywords
Proteínas Facilitadoras del Transporte de la Glucosa, Glucosa, Adenovirus