Co-expresión de una variante de la cápside del circovirus porcino tipo 2 e Interferón alfa porcino en un nuevo diseño de vectores de integración en Pichia pastoris.
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Date
2016
Authors
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Publisher
Universidad de Concepción.
Abstract
El Síndrome de Desmedro Multisistémico Post-destete (PMWS), es una
enfermedad viral producida por la infección del Circovirus porcino tipo 2 (PCV2). Este
virus infecta células del sistema inmune como células dendríticas, monocitos y macrófagos,
debilitando al animal contra infecciones de patógenos concomitantes. Los animales que
cursan PMWS pueden alcanzar una morbi-mortalidad del 60%. Actualmente existen
alternativas de vacunación que no eliminan la infección subclínica.
En el presente trabajo, se muestra la generación de una formulación vacunal para
la prevención del PMWS, la cual combina: Una variante antigénica de la cápside del PCV2
llamada Quimera1 con la citoquina inmunoreguladora INF-α porcino. Se diseñó un vector
plasmidial que permite la integración genética estable en la levadura metilotrófica Pichia
pastoris y la co-expresión de las dos proteínas de interés bajo el control del promotor
inducible por metanol AOX1 propio de la levadura. El constructo génico favorece la
expresión intracelular de la proteína Quimera1, mientras que la expresión de la citoquina
fue direccionada a la ruta de secreción extracelular, para la facilidad de separación de las
proteínas y la posible aplicación de estas fases en una formulación vacunal eficiente para
controlar el PMWS.
En este trabajo se demuestró por ensayos de dot blot y southern blot la correcta
inserción del material genético en el ADN de las levadura generando clones de Pichia
pastoris genéticamente transformados. Se demuestra la expresión de las proteínas
recombinantes con los direccionamientos celulares seleccionados, mediante ensayos de
western blot. La variante antigénica recombinante del PCV2 fue reconocida por el suero de
animales naturalmente infectados con el PCV2, y el INF-α porcino secretado en el
sobrenadante de cultivo promueve efectivamente la proliferación de mononucleares de
sangre periférica
Description
Tesis para optar al grado de Magíster en Bioquímica y Bioinformática.
Keywords
ADN, Síndrome Multisistémico de Emaciación Posdestete Porcino, Infecciones por Circoviridae, Circovirus