Detección y tipificación molecular de Staphylococcus aureus y Staphylococcus aureus resistente a meticilina (SARM) en Dakota del Norte, Estados Unidos.
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Date
2014
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Publisher
Universidad de Concepción.
Abstract
La emergencia y la propagación de patógenos resistentes a agentes antimicrobianos ha
aumentado la preocupación en materia de salud pública a nivel mundial. El uso de antibióticos
en producción animal, en profilaxis, terapia y promoción del crecimiento, se asocia a la
emergencia de patógenos resistentes en el ganado. La exposición del ganado a dosis
subterapéuticas de agentes antimicrobianos genera un reservorio de patógenos resistentes en
los animales con el riesgo de transmisión a las personas a través de la cadena productiva de la
carne. Uno de los patógenos que desarrolla rápidamente resistencia a múltiples agentes
antimicrobianos (MR) es Staphylococcus aureus. En especial, las cepas de S. aureus resistente
a meticilina (SARM) constituyen una causa importante de infecciones asociadas a hospitales
(HA-MRSA), a la comunidad (CA-MRSA) y al ganado (LA-MRSA). La capacidad de
colonizar las fosas nasales y piel de humanos y animales que posee S. aureus y la detección de
cepas de SARM y S. aureus MR en animales de abasto y en carne, aumentan la probabiliadad
de contaminación de los alimentos en las diferentes etapas de la cadena productiva. La
resistencia a la meticilina se atribuye a la proteína de unión a la penicilina 2a (PBP2a)
codificada en el gen mecA, que forma parte del casssette cromosómico estafilocócico mec
(SCCmec). Esta proteína le confiere a las cepas de SARM una baja afinidad por antibióticos b-
lactámicos. A su vez, las cepas CA-MRSA produccen generalmente la exotoxina Leucocidina
de Panton-Valentine (PVL), la cual constituye un factor de virulencia asociado a infecciones
de la piel y necrosis de tejidos. Por lo tanto, debido al impacto que pueden tener estas cepas de
S. aureus en la salud humana, resulta relevante evaluar si los productos alimenticalimenticios pueden
ser un foco de contaminación que facilite la propagación de estas infecciones.
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El objetivo de este estudio fue establecer la prevalencia y los tipos moleculares de S.
aureus y SARM en animales de abasto, carne cruda, productos cárnicos y humanos,
determinando la relación filogenética entre las cepas.
Se aisló S. aureus desde 167 muestras nasales de animales, 145 muestras de carne
cruda y 46 muestras de productos cárnicos, utilizando una etapa de enriquecimiento selectivo
en dos pasos, seguido de cultivo en placa. Los aislados que resultaron ser positivos se
sometieron al análisis por PCR múltiple (PCRm) para identificar los genes: ARNr 16S
(identificación de S. aureus), mecA (detección de SARM) y PVL (factor de virulencia
asociado a CA-MRSA). Para la tipificación molecular de las cepas de S. aureus se utilizó
electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE) y tipificación de secuencias multilocus
(MLST). El análisis de susceptibilidad antimicrobiana se llevó a cabo a través del método de
microdilución en caldo. Además, se aisló e identificó S. aureus desde muestras de fosas
nasales de 550 personas sanas a través de métodos de cultivo y análisis bioquímico. Un total
de 108 aislados clínicos de cepas SARM obtenidos de pacientes hospitalizados se analizaron a
través de PCRm para confirmar la presencia de S. aureus y detectar las cepas con los genes
mecA y PVL. Se desarrolló un método de PCR múltiple en tiempo real con el fin de disminuir
el tiempo de análisis de muestras de animales y carne y para aumentar la sensibilidad de
detección de S. aureus y de los genes mecA y PVL. Este procedimiento se realizó con
posterioridad al enriquecimiento primario y al secundario que preceden al cultivo en placa.
Los resultados se compararon con el método de cultivo que incorpora el enriquecimiento
selectivo en dos pasos para aislar S. aureus. Se analizó un total de 234 muestras a través de
estos métodos (77 muestras nasales de animales, 112 muestras de carne cruda y 45 muestras
de productos cárnicos).
La prevalencia total de S. aureus determinada luego del análisis de las muestras por el
método de cultivo con doble enriquecimiento fue de 34,7% en animales, siendo más alta en
cerdos (50,0%) y corderos (40,6%) (P<0,05). En carne cruda la prevalencia fue de 47,6%,
siendo más alta en carne de pollo (67,6%) y de cerdo (49,3%) (P<0,05). En productos cárnicos
la prevalencia fue de 13,0% (Figura 1). Cinco muestras de carne de cerdo (7,0%) fueron
positivas para el gen mecA, de las cuales tres correspondieron al serotipo ST398 y dos al
serotipo ST5. Todas estas cepas exhibieron resistencia a la penicilina y cuatro fueron MR. En
ninguna de las muestras se detectaron a través de PCRm los genes PVL.
Description
Tesis para optar al grado de Doctor en Ciencias Agropecuarias.
Keywords
Animales de Carne, Productos Cárnicos, Stafilococos Dorados.