Desarrollo de un protocolo de clonamiento de las proteínas recombinantes del virus SARS-COV-2 NUCLEOCAPSIDE y ORF3B para ampliar el análisis de la respuesta humoral en COVID-19.
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Date
2022
Authors
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Publisher
Universidad de Concepción
Abstract
La respuesta inmune generada por el virus SARS-CoV-2 asociado a la patología mundialmente conocida COVID-19, es identificada clínicamente a través de spike (S). Debido a las constantes mutaciones genéticas de la proteína viral, nace la necesidad de identificar nuevos antígenos que cubran la misma necesidad. Hipótesis: Al desarrollar un protocolo de clonamiento para las proteínas recombinantes NP y ORF3b del virus SARS-CoV-2 en vectores plasmidiales, se generan productos de ligación adecuados para un posterior uso en el sistema de inmunoprecipitación por luciferasa (LIPS). Objetivo: Desarrollar un protocolo de clonamiento de las proteínas recombinantes del virus SARS-CoV-2 NP y ORF3b en vectores plasmidiales adecuados para su uso en el sistema de inmunoprecipitación por luciferasa (LIPS). Metodología: Uso de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real, transformación de bacterias electrocompetentes y digestión con enzimas de restricción. Resultados: Se desarrolló un protocolo para la obtención de productos clonados de NP y ORF3b en un plásmido eucarionte pNLF1-N. Conclusión: Hay presencia de producto de ligación de las proteínas recombinantes NP y ORF3b con el plásmido eucarionte pNLF1-N, estandarizando el paso inicial para realización de LIPS que permitiría posteriormente, determinar la respuesta humoral en COVID-19 frente a estos antígenos.
Description
Tesis presentada para optar al título de Bioquímico/a.
Keywords
Proteínas recombinantes, Virus del SARS, COVID-19 (enfermedad), Antígenos