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Estudio del nivel de expresión de canales de potasio activados por calcio de alta conductancia (BKCa) y la variación del potencial de membrana en HUVECs de pacientes con diabesidad gestacional.
(Universidad de Concepción, 2023) Torres Farías, Javier Eduardo; González Ortiz, Marcelo Andrés
La diabesidad gestacional (DG) es una enfermedad producida por la convergencia de patologías ampliamente conocidas como la diabetes mellitus gestacional (DMG) y obesidad materna. Por lo tanto, se considera un factor de riesgo aún más relevante para la generación de enfermedades cardiovasculares (ECV). Los índices de obesidad materna en chile se han visto aumentados en un 12.34% entre el año 2008-2017, lo cual lleva a ser un factor de riesgo predeterminante para generar diabetes mellitus gestacional (DMG), desencadenando en diabesidad gestacional (DG). Esta patología cursa con un proceso fisiopatológico de disfunción endotelial, en donde se ve afectado el equilibrio de los procesos de vasoconstricción y vasodilatación. En la mantención de este equilibrio están involucrados los canales de potasio activados por calcio de alta conductancia (BK), ya que su función principal está relacionada con la regulación del mecanismo de hiperpolarización derivada de endotelio (EDH), fundamental para la vasodilatación. En la actual investigación, se estudiaron células endoteliales de vena umbilical humana (HUVECs) obtenidas desde embarazos sanos o diagnosticados con diabesidad gestacional. Se evaluó la expresión de RNA y proteínas de las subunidades  y 1 de BKCa mediante técnicas de RT-PCR e Inmunofluorescencia, respectivamente. Además, se analizó la función de canales BKCa al evaluar el efecto de la inhibición de canales de potasio activados por calcio sobre el potencial de membrana, determinado mediante la sonda DIBAC4(3). También se determinó el efecto de concentraciones crecientes de insulina (0,1-100 nM) sobre este parámetro. Los resultados muestran un aumento en la expresión de subunidades  y 1, junto con un estado de hiperpolarización basal en HUVECs DG. Mientras que en células normales se produce una respuesta hiperpolarizante con insulina, este efecto se pierde en células DG. En conclusión, se propone que en diabesidad gestacional existe un estado de hiperpolarización compensatorio y un aumento en la expresión de los canales BKCa en HUVECs.
Caracterización de la expresión del receptor de Neurotrofinas P75 en modelo murino de dolor neuropático.
(Universidad de Concepción, 2024) Recabarren Cancino, Sofía Belén; Pérez Fernández, Viviana Ivonne
El dolor neuropático, una aflicción con impacto significativo en la calidad de vida de los pacientes, surge de una lesión o enfermedad del sistema somatosensorial. La señalización molecular del dolor crónico ha sido vinculada con alteraciones en la expresión y función de neurotrofinas y sus receptores Trks y p75, de alta y baja afinidad respectivamente. Durante el dolor neuropático, incrementa la expresión de neurotrofinas junto a sus receptores específicos Trks. Sin embargo, aun cuando existe evidencia que relaciona la participación de p75 en la regulación neurofisiológica del dolor, su estudio no ha sido ampliamente abordado. Esta investigación caracterizó la expresión y función del receptor p75 durante el dolor neuropático en modelos murinos, enfocándose principalmente en los cambios moleculares que ocurren en la medula espinal. Los resultados obtenidos mostraron un incremento de la expresión de p75 en la médula espinal, la expresión de este receptor en las láminas más externas del asta dorsal y la activación de proteínas ERK, implicadas en la mantención del dolor neuropático a través del tiempo. Al comprender la participación del receptor p75 en la neurofisiología del dolor, se busca contribuir al estudio de las neurotrofinas en el dolor neuropático y colaborar en la propuesta de nuevos blancos terapéuticos para la neurofarmacología del dolor.
Asociación de la ingesta de vitamina A y vitamina C con el perfil lipídico y el rol mediador de enzimas antioxidantes en población chilena hipercolesterolémica.
(Universidad de Concepción, 2023) Ramos Pardo, Sofía Cristina; Martorell Pons, Miquel
Las enfermedades cardiovasculares (ECV) son la primera causa de muerte a nivel mundial. Dentro de las ECV un factor de riesgo importante es la aterosclerosis que se desarrolla por la hipercolesterolemia. Los alimentos que contienen altos niveles de fitoquímicos, antioxidantes y fibra contribuyen a regular los niveles de estrés oxidativo presente en estas patologías y potencian la actividad de enzimas antioxidantes presentes en el organismo humano. Se desconoce si existe un rol mediador de enzimas antioxidantes endógenas sobre la asociación entre antioxidantes exógenos y perfil lipídico. Por lo anterior, el objetivo de la presente propuesta es estudiar la asociación de antioxidantes exógenos con lípidos circulantes y la potencial mediación por enzimas antioxidantes en sujetos con hipercolesterolemia. Se reclutaron 67 sujetos hipercolesterolémicos para evaluar su ingesta de vitamina A y vitamina C, además de medir la actividad enzimática de superóxido dismutasa y catalasa en plasma. Dentro de los resultados existe una asociación entre la ingesta de vitamina A y el colesterol LDL. Se concluye que el consumo vitamina A está asociado al colesterol LDL y no hay actividad enzimática de superóxido dismutasa o catalasa mediando esta asociación. Se espera que este estudio sirva como base para averiguar los mecanismos de esta asociación.
Diseño y aplicación de un modelo piloto de pesquisa por oportunidad de Hipercolesterolemia Familiar en el Hospital Las Higueras.
(Universidad de Concepción, 2023) Portiño Escobar, René Vladimir; Sánchez Rubio, Andrea Alejandra
La Hipercolesterolemia Familiar (HF) es una enfermedad autosómica dominante con un patrón de herencia mendeliana, caracterizada por un aumento de colesterol de baja densidad (c-LDL), asociado a un elevado riesgo cardiovascular y enfermedad cardiovascular (ECV) prematura. En Chile, no existe ningún método de diagnóstico genético de certeza de HF, es por ello que se hace necesario implementar estrategias metodológicas que permitan hacer una detección certera de esta patología. El objetivo de este trabajo fue, diseñar y aplicar un modelo piloto de pesquisa por oportunidad de Hipercolesterolemia Familiar en el Laboratorio Clínico del Hospital Las Higueras de Talcahuano. Entre los resultados más destacados, se logró llevar acabo el diseño y la aplicación de este método piloto, estableciendo criterios de inclusión y exclusión que nos permitieron, desde un gran banco de 36.806 perfiles lipídicos, seleccionar un grupo de 358 pacientes con características sugerentes de HF. Utilizando análisis estadísticos caracterizamos a nuestra población de pacientes seleccionados, y encontramos diferencias significativas entre grupos que conformaron esta población. No solo en características como edad, sexo y parámetros lipídicos, sino que también en procedencia y puntajes DLCN. Del total de nuestros pacientes seleccionados, 348 (97%) de ellos obtuvo un puntaje de posible HF (3-5ptos), 5 (1%) pacientes obtuvieron un puntaje probable (6-7ptos), y 5 (1%) obtuvieron un puntaje de certeza (≥8ptos). Finalmente, utilizando la herramienta de pesquisa, el criterio DLCN, se seleccionaron 10 pacientes candidatos para un estudio genético de HF.
Validación de la detección de SARS-COV-2 mediante RT-PCR en tiempo real utilizando muestra de saliva.
(Universidad de Concepción, 2023) Pacheco Vidal, Juan Carlos; Zúñiga Arbalti, Felipe Andrés
La pandemia provocada por COVID-19 ha generado una enorme demanda de exámenes para detectar la enfermedad estableciendo una aguda falta de insumos para el diagnóstico RT-qPCR. Esta falta de insumos afecta principalmente las etapas de toma de muestra y extracción de ARN. Se suman las molestias que sufren los pacientes al hacerse el examen por Hisopado nasofaríngeo y el riesgo de contagio para el personal sanitario encargado de la toma de muestra que además debe mantener un ritmo acelerado para cubrir la demanda de exámenes. Esto plantea la necesidad de buscar alternativas de diagnóstico que contemplen minimizar la complejidad operativa de la toma de muestra y del procedimiento de extracción de ARN. El método SalivaDirect™ propuesto por el Departamento de Microbiología de Enfermedades Microbianas de la Escuela de Salud Pública de Yale ofrece una alternativa al método convencional que usa muestras obtenidas por Hisopado nasofaríngeo. Se trata de una prueba simplificada de RT-qPCR para diagnóstico de COVID-19 que analiza la presencia de SARS-CoV-2 desde una muestra de saliva. Para la implementación de esta técnica se estandariza la toma de muestra, la extracción de material genético y la amplificación de este por medio de RT-qPCR, posteriormente se determinan los Criterios de Aceptabilidad para evaluar el desempeño del protocolo. Este método se presenta como una alternativa segura, cómoda y fiable para la toma de muestras infecciosas por SARS-CoV-2 proveyendo resultados comparables a los obtenidos por las muestras de Hisopado nasofaríngeo evitándose los atascos provocados por la falta de insumos, brindando comodidad y confiabilidad a los pacientes además de seguridad adicional al personal clínico.
Caracterización morfológica y molecular de médula espinal y cerebro de cobayos deficientes en vitamina C como posible modelo animal de esclerosis lateral amiotrófica.
(Universidad de Concepción, 2024) Muñoz Monje, Valentina Andrea; Jara Mendoza, Nery Alejandra; Nualart Santander, Francisco Javier
La esclerosis lateral amiotrófica (ELA) es una enfermedad neurodegenerativa que afecta al sistema nervioso central (SNC). Se caracteriza por la degeneración y disfunción de las neuronas superiores e inferiores, lo que lleva a la debilidad progresiva de músculos esqueléticos voluntarios. Estudios han evaluado el efecto de la dieta en la progresión y desarrollo de enfermedades neurodegenerativas. En particular, la vitamina C se encuentra involucrada en varios procesos fisiológicos del SNC. EL rol de la vitamina C como un importante antioxidante a nivel cerebral nos sugiere que su deficiencia podría estar involucrada en el desarrollo y progresión de enfermedades neurodegenerativas como el ELA. Esta tesis postulaba que el cobayo con deficiencia de vitamina C reproducía características morfológicas y moleculares que se observan en ELA. A través de técnicas histológicas, inmunohistoquímica e inmunofluorescencia, se determinó que la deficiencia de vitamina C no induce degeneración neuronal ni activación de vías de muerte celular. Sin embargo, se observaron alteraciones en los procesos neuronales corticales, así como también alteraciones en el RE de las neuronas, activación de astrocitos en el tronco encefálico y la sustancia blanca de la médula espinal, y una disminución en la expresión del transportador SVCT2 en la vía corticoespinal. Este estudio se centra en la importancia de la Vitamina C, la cual es considerado el antioxidante más abundante del SNC, regulando una variedad de funciones y protegiendo a las distintas células neuronales.
Determinación del efecto de la pérdida de peso por una dieta restringida en calorías en neuronas POMC de ratones obesos inducidos por dieta (DIO).
(Universidad de Concepción, 2023) Manríquez Cuadra, Isidora Francisca; Tarifeño Saldivia, Estefanía Salomé
La obesidad es una condición metabólica generada por ingesta excesiva de calorías, la cual establece un ambiente proinflamatorio sistémico, afectando diversos órganos, tales como el cerebro. El hipotálamo es una región del cerebro encargada de regular la ingesta alimenticia, donde destaca una población neuronal denominada POMC, que está involucrada en la producción de señales de saciedad. En este sentido, se ha demostrado que al inducir obesidad en modelos murinos mediante dieta alta en grasas, a largo plazo esta población neuronal se ve disminuida en número, afectando su funcionamiento. Sin embargo, qué ocurre al bajar de peso en esta población neuronal es un tópico poco estudiado. Esta investigación examina el impacto de la pérdida de peso mediante restricción calórica en el número de neuronas POMC en ratones obesos inducidos por dieta alta en grasas (DIO mice) macho, mediante la obtención y análisis de imágenes confocales. Los resultados demuestran que la restricción calórica genera una tendencia a una reducción en las poblaciones de neuronas POMC. Estos hallazgos destacan las complejas interacciones entre la obesidad, la restricción calórica y las neuronas POMC en la regulación energética. Comprender estas relaciones puede ayudar en el desarrollo de intervenciones específicas para la obesidad y los trastornos metabólicos.
Determinación de la susceptibilidad antibiótica y su relación con la formación de biopelículas en cepas de Helicobacter pylori aisladas desde pacientes de la región de la Araucanía.
(Universidad de Concepción, 2024) Henríquez González, Daniel Sebastián; García Cancino, Apolinaria del Rosario
Helicobacter pylori es una de las bacterias con mayor presencia en el mundo, más aún en países subdesarrollados como lo es Chile. Es responsable de numerosas patologías gastrointestinales y destaca por ser el principal factor de riesgo para el desarrollo del cáncer gástrico. En los últimos años se ha visto un incremento en su resistencia a las terapias antibióticas, y a pesar de eso, en Chile son escasos los estudios enfocados en el comportamiento de estas bacterias frente a las terapias que se utilizan en el país. Estas bacterias se encapsulan en una matriz extracelular que las envuelve para formar una biopelícula que las protege de amenazas externas. Estas biopelículas pueden influir en el accionar de los antibióticos, haciendo que pierdan su efectividad, lo que podría explicar el aumento en la resistencia de estas bacterias y ofrecer una nueva perspectiva en la manera que se emplean las terapias con antibióticos. Es por esto, que este estudio se enfocó en determinar la resistencia de cepas clínicas aisladas de pacientes de la región de la Araucanía, además de complementar estos estudios con ensayos de formación de biopelículas y establecer una relación entre biopelículas y resistencia antibiótica. Los resultados indican un aumento en la resistencia frente a claritromicina y tetraciclina en bacterias sésiles (aquellas que forman parte de la biopelícula), además se evidenció una tendencia al aumento general en la resistencia a los antibióticos estudiados y un aumento en la producción de biopelículas en las cepas estudiadas.
Autoevaluación de la gestión de procesos analíticos del Laboratorio DAS Hualqui en base a los estándares de acreditación de atención abierta.
(Universidad de Concepción, 2023) Gálvez Acuña, Felipe Eduardo; Lamperti Fernández, Liliana Ivone
El presente proyecto pretende contribuir a generar las bases para una futura oportunidad de acreditación del CESFAM de Hualqui bajo los lineamientos de la acreditación de salud a nivel nacional. La cual hace referencia a un proceso periódico de evaluación, al cual se someten las entidades prestadoras de salud. Esta acreditación desagrega sus exigencias y requisitos en ámbitos, componentes, características y verificadores; en donde en este proyecto se enfocará en el área del Laboratorio DAS Hualqui hacia el área de toma de muestras del CESFAM Hualqui, CECOSF Hualqui, Postas Rural Quilacoya y Talcamávida; y Estación Médico Rural Unihue, las cuales envían muestras al laboratorio. De la pauta de cotejo del Manual del Estándar General de Acreditación para Prestadores Institucionales de Atención Abierta nos enfocaremos en los Servicios de Apoyo – Laboratorio Clínico (APL), el cual posee cinco características APL, de las cuales nos centraremos en cuatro. El proyecto contempla tres etapas: La primera un levantamiento de información para realizar un diagnóstico por parte del Laboratorio DAS Hualqui, hacia el área de Toma de Muestras. Esta primera etapa será con el fin de determinar qué puntos de verificación se están cumpliendo y cuales debemos mejorar de acuerdo a lo que nos exige la pauta de cotejo para la futura acreditación. Una vez verificado los elementos medibles que exige cada característica se procederá a la segunda etapa del proyecto que será la elaboración de propuestas para mejorar los puntos de verificación faltantes. En paralelo a estas etapas del proyecto, una tercera etapa se llevará a cabo, midiendo el Control de Calidad Interno y Externo de la sección de Química Clínica, con la finalidad de evaluar el desempeño de calidad en esta área.
Análisis de los residuos relevantes en la coordinación con el cofactor Manganeso en la Agmatinase Like protein (ALP).
(Universidad de Concepción, 2024) Fuentes Leyton, Allison Marioth; Uribe Pérez, Elena Amparo
La agmatinase like protein (ALP) es una enzima que se clonó a partir de una librería de genes de cerebro de rata y presenta actividad agmatinasa, hidrolizando la agmatina a putrescina y urea. Esta enzima requiere Mn2+ como cofactor y posee un bajo porcentaje de identidad con las agmatinasas conocidas, no conservando los residuos de coordinación al metal activador. En trabajos previos del laboratorio por la falta de información estructural se realizó un modelo estructural de ALP, en el cual se propusieron 5 posibles residuos que interaccionarían con el cofactor Mn2+. Se generó una mutante triple (N213A/Q215A/D217A) y una mutante doble (E288A/K290A) de estos residuos y ambas mutantes no presentaron actividad enzimática. Esta tesis tiene como objetivo evaluar la participación de cada uno de los residuos de la mutante triple en la actividad y coordinación metálica de ALP. Para ello, se generaron mutantes simples reemplazando cada residuo por alanina a través de mutagénesis sitio dirigida, se purificó parcialmente cada enzima por cromatografía de intercambio aniónico y se analizaron sus parámetros cinéticos. Como resultado, se obtuvo que las tres mutantes simples presentaron valores de Km y Vmáx menores que la enzima silvestre. Para analizar la interacción enzima-Mn2+, se realizaron experimentos de activación enzimática, diálisis, hiperactivación, determinación del contenido metálico y especificidad de la activación con el metal y en todos los resultados las tres mutantes simples no mostraron diferencias con la enzima silvestre. Concluimos que las tres mutaciones simples afectaron el sitio activo de la enzima ya que alteraron sus parámetros cinéticos y postulamos que estos residuos se encuentran próximos al sitio activo. Dado que las mutaciones no alteraron la interacción enzima-Mn2+ concluimos que estos residuos no participan directamente como ligandos coordinantes del metal activador Mn2+.
Nuevos compuestos sintéticos similares a Xestospongina B: evaluación del efecto anti-migratorio y anti-invasivo en líneas celulares de cáncer de mama.
(Universidad de Concepción, 2023) Farías Cartes, Paula Isadora; Castro Alma, Ariel Fernando; Cárdenas Matus, Julio César; Ahumada Castro, Ulises Jonás
El cáncer es un gran conjunto de enfermedades, todas caracterizadas como un desorden celular, en el cual células transformadas crecen y proliferan anormalmente y tienen el potencial de diseminarse e invadir tejidos sanos en el cuerpo. Estas células poseen 8 características biológicas adquiridas durante el proceso de progresión tumoral, dentro de las que se encuentra alterada la bioenergética celular. Las células cancerosas tienen una alta capacidad para reprogramar su metabolismo frente a cambios en la disponibilidad de sustratos o estrés metabólico, siendo una respuesta adaptativa que promueve la sobrevida celular. La anormalidad metabólica mejor caracterizada en células tumorales es el efecto Warburg, que limita la producción de energía principalmente a glicólisis en presencia de oxígeno. Sin embargo, se ha demostrado que el metabolismo oxidativo mitocondrial también tiene un papel fundamental en la tumorigénesis. Existe poca información respecto al rol del metabolismo mitocondrial en los procesos de migración e invasión de la cascada metastásica. Evidencia reciente demuestra que al interferir el metabolismo mitocondrial dependiente de calcio (Ca2+) se puede reducir la migración e invasión a la matriz circundante de células tumorales. Los receptores de IP3 (IP3R) son los principales canales de Ca2+ responsables de su liberación desde el retículo endoplásmico (RE) y de la comunicación de éste con la mitocondria, en donde el Ca2+ permite el mantenimiento de la bioenergética celular. La disrupción de esta comunicación RE-mitocondria genera una crisis bioenergética que activa una respuesta autofágica, y que reduce la capacidad de sobrevida y proliferación de células tumorales. Para estos estudios se ha utilizado un inhibidor competitivo del IP3R llamado Xestospongina B (XeB), un compuesto natural de difícil obtención y purificación, por lo que se han sintetizado nuevos compuestos similares, cuyo efecto sobre células tumorales permanece aún sin estudiar. El propósito de este trabajo es determinar si estos compuestos muestran propiedades similares a XeB. Para esto se evaluarán sus efectos sobre respiración celular, viabilidad, migración e invasión en líneas celulares de cáncer de mama. Se espera que tal como XeB natural, los compuestos sintéticos reduzcan la migración e invasión de manera específica en células de cáncer de mama.
Comparación de las capacidades adaptativas de cepas de Helicobacter pylori con diferentes perfiles de susceptibilidad antibiótica.
(Universidad de Concepción, 2023) Deride Alegría, Macarena Belén; García Cancino, Apolinaria del Rosario; Parra Sepúlveda, Cristian Andrés
Helicobacter pylori es una bacteria cosmopolita de alta prevalencia en Chile. Esta infección se relaciona a múltiples enfermedades gastrointestinales donde destaca su implicancia en el desarrollo de cáncer gástrico. Se ha reportado que ciertos mecanismos estarían implicados en la resistencia antibiótica y por ende en el fracaso terapéutico. Algunos de estos mecanismos son su capacidad para formar biopelícula, hacer ingreso a levaduras y cambiar su morfología. El objetivo de este estudio fue evaluar si existe una diferencia entre cepas catalogadas fenotípicamente como resistentes o susceptibles a antibióticos y su capacidad para desempeñar estos mecanismos. Se determinó que el 100% de las cepas clínicas del sur de Chile eran formadoras de biopelícula, hacían ingreso a levaduras a distintas magnitudes y presentaban una morfología cocoide en cultivos prolongados a distintos tiempos. Si bien no se encontró una diferencia significativa entre grupos de distinta susceptibilidad si se puede concluir que estas capacidades están presentes transversalmente en cepas de H. pylori de la región sur de Chile pudiendo favorecer su poder de infección, resistencia antibiótica y contribuyendo así a la falla en el tratamiento.
Efecto del estrés por aislamiento social sobre la conducta y perfil inflamatorio en ratones hembra.
(Universidad de Concepción, 2023) Cepeda Barrales, María Yamila; Elizondo Vega, Roberto Javier; Oyarce Merino, Karina Alejandra
Diversos estudios señalan que el estrés psicosocial crónico promueve un ambiente pro inflamatorio, el cual podría explicar en parte los efectos perjudiciales sobre la fisiología del organismo. En este contexto las células T reguladoras (Treg), una subpoblación de linfocitos T CD4+CD25+Foxp3+ podrían favorecer la recuperación de la homeostasis inmune, debido a su capacidad para suprimir la función de las células T efectoras. Sin embargo, durante fenómenos inflamatorios crónicos, se observa deterioro en la función y una disminución en el número de esta población celular, lo que también se ha observado en roedores. Aun cuando se reconocen las diferencias sexuales asociadas a la fisiología del estrés, la gran mayoría de los estudios utilizan ratones macho como modelos, dejando de lado el análisis de hembras y cómo su fisiología se ve alterada. El objetivo de esta tesis es evaluar el efecto del estrés por aislamiento social en patrones conductuales y frecuencia de Linfocitos T reguladores en ratones hembra. Para ello, se sometió a hembras a un protocolo de aislamiento social por 8 semanas, tras lo cual analizamos su patrón conductual para detectar signos de ansiedad y depresión y evaluamos la presencia de cortisol y citoquinas proinflamatorias y anti-inflamatorias en bazo. Por otro lado, se analizó mediante citometría de flujo la frecuencia de las células T reguladoras y T efectoras activadas derivadas de hembras estresadas. De este modo fue posible identificar que el aislamiento social induce comportamiento depresivo en ratón hembra, pero contrario a lo que hipotetizamos, no fue posible identificar un ambiente proinflamatorio a nivel periférico en las hembras estresadas.
Producción, purificación y caracterización del factor neurotrófico derivado del cerebro humano.
(Universidad de Concepción, 2023) Castro Henriquez, Pablo Ignacio; Sánchez Ramos, Oliberto
Existe una serie de proteínas pertenecientes a la familia de las neurotrofinas que se encargan de regular distintas funciones a nivel del sistema nervioso central (SNC). Entre estas distintas neurotrofinas se encuentra el factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF) el cual actúa en ciertas neuronas del SNC ayudando a modular la supervivencia de neuronas existentes, y promoviendo el crecimiento y diferenciación de nuevas neuronas. El BDNF puede unirse a dos receptores, el receptor tropomiosina quinasa B (TrkB) y el receptor de neurotrofina p75 (p75NTR), de manera que al unirse con TrkB se promueven las funciones de BDNF, mientras que la unión al p75NTR induce vías de señalización apoptóticas o de degeneración, lo que conlleva a desordenes neurológicos y neuropsiquiátricos. Se ha visto en estudios que la existencia de un polimorfismo en el pro-dominio del BDNF, denominado Val66Met (V66M) el cual podría estar relacionado con la generación de distintas enfermedades neurodegenerativas, lo cual aún no está muy claro. Se ha visto que los niveles de BDNF se han encontrado disminuidos en distintas enfermedades neurodegenerativas, tales como el trastorno depresivo mayor, enfermedad de Huntington, Alzheimer, entre otras. A raíz de estos hallazgos es que surge el interés de producir BDNF humano de manera recombinante pensando en una posible aplicación terapéutica más a futuro.
Exploración estructural y textural de polímeros de coordinación de alta dimensionalidad basados en bispirazolonas y lantánidos.
(Universidad de Concepción, 2024) Castillo Gómez, Rodrigo Fernando; Jiménez Águila, Claudio Andrés; Hidalgo Córdova, Paulina
Actualmente las técnicas de detección, análisis y separación son cada vez más avanzadas y asertivas, la generación de nuevas metodologías se ha convertido en un reto que ha estimulado el desarrollo de nuevas moléculas. En este contexto los polímeros de coordinación han llamado la atención por su versatilidad y características bien definidas, tales como su porosidad permanente y alta capacidad de modificación. Por otro lado, los lantánidos se han transformado en piezas claves en la construcción de materiales moleculares dadas sus características luminiscentes, magnéticas o catalíticas posicionándolos como materiales de interés en la búsqueda de moléculas con fines analíticos. Este trabajo involucró la exploración sintética de conectores orgánicos con el fin de obtener polímeros de coordinación de alta dimensionalidad basados en pirazolonas y lantánidos y su posterior análisis estructural. Primero se sintetizaron dos ligandos orgánicos de tipo bis-hidroxiiminopirazolona, los que fueron caracterizados mediante FT-IR, RMN de 1H. Posteriormente se evaluaron varios protocolos de síntesis solvotermal para generar las metalosupramoléculas entre los ligandos bis-hidroxiiminopirazolona y centros metálicos lantanoides. Los complejos obtenidos fueron caracterizados mediante FT-IR, difracción de rayos X de monocristal. El análisis relacionado a las interacciones supramoleculares de ellos se llevó a cabo mediante softwares de análisis cristalográficos. De manera complementaria se estudiaron las características fotofísicas en solución de uno de los complejos obtenidos.
Caracterización de genes expresados diferencialmente en pedicelo de uva de mesa en respuesta a desgrane por tratamiento con ácido giberélico.
(Universidad de Concepción, 2022) Carrasco Pérez, Carlos Felipe; Urrutia Briones, Homero Enrique
La susceptibilidad al desgrane de ciertos genotipos de uva de mesa está asociada a la expresión diferencial de genes expresados en el pedicelo en respuesta al tratamiento con ácido giberélico (GA3). Se caracterizaron genes diferencialmente expresados en la estructura en genotipos susceptibles a desgrane por tratamiento con ácido giberélico. Para ello se estudió la expresión de genes identificados mediante análisis transcriptómico (ARN-Seq) por comparación de muestras tratadas y no tratadas con la fitohormona y seleccionándolas a partir de su función biológica asociada al fenotipo (desgrane). Estos genes se validaron mediante análisis PCR tiempo real comparando muestras de ARN obtenidas de variedades que presentan diferentes respuestas contrastantes al desgrane frente a aplicaciones de GA3 y sus respectivos controles. Esto se realizó con la toma de muestras en diferentes estados fenológicos para observar su perfil de expresión a lo largo del desarrollo de la baya. Un total de 9 genes fueron seleccionados para ser analizados: VvPAL, VvCCOAOMT, VvRAP2-3, VvCCR1, VvMETK5, VvLAC12, VvGA2ox8, VvDCR y VvJMT. Estos genes presentaron una expresión diferencial y posteriormente podrían servir para desarrollar marcadores de selección para descartar progenitores y variedades con propensión a desgrane.
Identificación de genes de resistencia a desinfectantes en cepas pre y post pandémicas de Staphylococcus aureus aisladas desde matrices alimentarias.
(Universidad de Concepción, 2023) Cárdenas Sánchez, Katalina Verónica; Opazo Capurro, Andrés Felipe
Staphylococcus aureus es la especie más importante del género Staphylococcus. Se describe como un microorganismo coco Gram-positivo no formador de esporas, anaerobio facultativo, oportunista y coagulasa positivo. Se caracteriza por ser un patógeno nosocomial que coloniza la piel, nariz y/o aparato gastrointestinal de las personas provocando una gran variedad de enfermedades; y la OMS lo ha catalogado como un patógeno de prioridad alta debido a que presenta resistencia a la meticilina. Investigaciones recientes dan cuenta que a través de los años S. aureus no solo ha generado resistencia a antimicrobianos sino también a desinfectantes como los compuestos de amonio cuaternario. Como consecuencia a la pandemia de COVID-19, se ha aumentado notablemente el uso de estos compuestos y se desconoce el estado actual de la resistencia a desinfectantes en cepas de S. aureus en nuestro país. El objetivo de esta investigación fue determinar la prevalencia de genes de resistencia a desinfectantes en cepas de S. aureus pre y post pandemia aisladas desde matrices alimentarias. Para ello se seleccionaron 54 cepas comprendidas entre los años 2012 y 2023, y se identificó la presencia de los genes de resistencia a desinfectantes qacA/B y smr mediante el uso de la técnica de PCR. Solo el 1.9% presentó el gen qacA/B y resultados similares se obtuvieron al realizar la amplificación del gen smr, dando indicios de que las cepas de S. aureus de origen alimentario no sufren del mismo modo la presión selectiva ejercida por los antimicrobianos y/o desinfectantes que las cepas encontradas entornos hospitalarios. Sin embargo, es necesario contar con un tamaño de muestra mayor y realizar más ensayos a futuro para poder tener resultados estadísticos robustos y significativos que confirmen esta conjetura.
Procedimiento de verificación analítica basado en CLSI EP15-A3 y construcción de carta de control para la determinación de cistatina C en el sistema de Nefelometría Atellica® NEPH630 realizado en el Laboratorio Clínico Diagnomed S.A.
(Universidad de Concepción, 2024) Cabezas Román, Alex Matías; Lamperti Fernández, Liliana Ivone
La creatinina, el principal biomarcador para la Insuficiencia Renal Aguda (IRA), presenta limitaciones por su variabilidad según la edad, dieta o masa muscular del paciente. En este contexto, la cistatina C emerge como una alternativa prometedora. Esta proteína, de bajo peso molecular y producción constante, no se ve afectada por los factores mencionados. Se filtra libremente en el glomérulo y se reabsorbe y cataboliza en el túbulo proximal, sin reingresar al torrente sanguíneo. Su principal ventaja radica en su capacidad de aumentar de 36 a 48 horas antes que la creatinina en la IRA, permitiendo un diagnóstico más precoz, crucial en la población pediátrica por las potenciales secuelas a largo plazo. En este estudio, se verificó con éxito la determinación de cistatina C en el sistema Atellica® NEPH630 del Laboratorio Clínico Diagnomed S.A., siguiendo el protocolo EP15-A3 del CLSI para la evaluación de la imprecisión y sesgo de los datos. Esta verificación abre la puerta a la puesta en marcha de la medida de la cistatina C como un biomarcador más preciso y temprano para la IRA, especialmente en la población pediátrica, mejorando la calidad del diagnóstico y el pronóstico de la enfermedad.
Verificación y concordancia de la técnica de Inmunoblot del equipo EuroBlot One en el Laboratorio de Inmunología del Hospital Regional Guillermo Grant Benavente, Concepción.
(Universidad de Concepción, 2024) Briones Jorquera, Valentina Javiera; Nova Lamperti, Estefanía Andrea; Carrión Faúndez, Manuel
Las enfermedades autoinmunes surgen a partir de una falla en los mecanismos de regulación del sistema inmunológico en el reconocimiento de lo propio. Un diagnóstico preciso es crucial debido a la complejidad de sus síntomas y la diversidad de autoanticuerpos asociados. La inmunofluorescencia indirecta (IFI) es una técnica comúnmente utilizada para detectar autoanticuerpos en muestras de pacientes, frente a antígenos nucleares de la línea celular HEp-2. Los patrones de fluorescencia pueden estar asociados a más de un autoanticuerpo, dificultando su interpretación, por lo que es necesario utilizar técnicas complementarias. Actualmente el Laboratorio de Inmunología del Hospital Guillermo Grant Benavente, requiere implementar la técnica de “Inmunoblot” del equipo EuroBlot One, para lo cual es necesario evaluar su desempeño analítico bajo las condiciones habituales del laboratorio. Por lo que el objetivo de este trabajo de internado es realizar la verificación de la técnica de inmunoblot en el equipo EURO Blot One y cálculo de su grado de concordancia con respecto a la técnica de inmunofluorescencia indirecta, para su implementación en el Laboratorio de Inmunología del Hospital Regional Guillermo Grant Benavente, Concepción. Esto se realizó bajo los lineamientos del EP12-a2 del C.L.S.I, utilizando 20 muestras controles procesadas en una misma corrida analítica en el equipo EuroBlot One, para luego calcular las medidas de concordancia respectivas. Dicho proceso arrojó un 75% de concordancia general, que no fue suficiente para dar por verificada la técnica de inmunoblot de EURO Blot One.
Análisis del perfil de N6-metiladenosina de ARN mensajeros en microglia infectada con virus de la inmunodeficiencia humana 1.
(Universidad de Concepción, 2024) Badilla Zambrano, Nicolás Antonio; Castro Alma, Ariel Fernando; Toro Ascuy, Daniela
Desde 1981 el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH)/síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) se ha vuelto una problemática humanitaria que ha ido en aumento, transformándose en una de las pandemias más devastadoras a nivel mundial (CDC, 1981). El último informe de ONUSIDA, al cierre del 2022, muestra que 39 millones de personas viven con el virus de la inmunodeficiencia humana de tipo 1 (VIH-1), 630.000 personas fallecieron a causa de enfermedades relacionadas con el SIDA, y 1,3 millones de personas contrajeron la infección por VIH-1. Aunque el desarrollo de Terapias Antirretrovirales (TAR) han permitido generar un tratamiento estándar para las personas diagnosticadas con VIH-1 que no estén en una etapa avanzada, mejorando en gran medida la calidad de vida de los pacientes, presenta como gran limitación la incapacidad de poder eliminar el reservorio viral latente (Vargas, 2016). Dentro de los tejidos que se encuentran como reservorios virales está el sistema nervioso central (SNC), y dada la continua replicación viral subclínica crónica puede dar origen a patologías como HAND (del inglés, HIV-associated Neurocognitive disorder ). Aunque la prevalencia de HAND no está estudiada a fondo, estudios han señalado que la mitad de los portadores de VIH con marcadores clínicos controlados presentan la patología (Churchill et al 2015). Para definir este tipo de trastorno neuropsiquiátrico, se clasificó el HAND en tres niveles, Deterioro cognitivo asintomático (ANI, por sus siglas en inglés), Trastorno neurocognitivo leve (MND, por sus siglas en inglés), y demencia asociada al VIH (HAD, por sus siglas en inglés) (Mitra & Sharman, 2023). El desarrollo de HAND en estos pacientes, si bien no disminuye su longevidad, si repercute en su calidad de vida. Los pacientes que cursan con esta patología, en donde se ve afectada la cognición, tienen más probabilidades de estar desempleados, les resulta difícil conducir y dependen más de los demás para sus actividades de la vida diaria como cocinar, comprar, realizar tareas financieras y de navegación por internet (Smail y Brew, 2018). Se ha

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