Caracterización de una cisteíno proteasa tipo Catepsina L presente en el núcleo de células HeLa.
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Date
2009
Authors
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Publisher
Universidad de Concepción
Abstract
stro laboratorio se ha reportado la presencia de una cisteíno proteasa (SpH proteasa) de 60 kDa homóloga a catepsina L humana que degrada las histonas espermáticas SpH de Tetrapygus niger durante la remodelación del pronúcleo masculino previo a su fusión con el pronúcleo femenino para formar el embrión. Posterior a esta fusión, SpH proteasa persiste en el núcleo de los cigotos co localizando con tubulina durante la división celular inicial del embrión (Concha y cols, 2005 a y b). La actividad de la SpH-proteasa está modulada por pH y por modificaciones postraduccionales, como poli(ADP-ribosilación) y fosforilación de sus sustratos (Morin y cols.1999 a, b). En el año 2004, Goulet y colaboradores reportaron la participación de una catepsina L nuclear de aproximadamente 32 kDa, en la regulación de la progresión del ciclo celular a través del procesamiento proteolítico del factor de transcripción CDP Cux, permitiendo la transición G1/S, encontrando, además, esta actividad en células transformadas (Goulet y cols, 2007). En este contexto, el reporte más reciente es el realizado por Sullivan y colaboradores (2009) quienes detectaron la presencia de una isoforma de catepsina L en el núcleo de células de cáncer colorectal. Basado en estas evidencias y que en nuestro laboratorio se tiene un anticuerpo policlonal anti SpH proteasa de erizo de mar homóloga a catepsina L, y en el rol que juega catepsina L, este trabajo de tesis se centró en la detección, purificación y - 6 - caracterización bioquímica de una proteasa potencialmente homóloga a SpH proteasa de T. niger presente en células HeLa (células de cáncer cérvico uterino). Se caracterizó una proteasa tipo catepsina L de peso molecular 60 kDa presente en el extracto nuclear de células HeLa, con actividad proteolítica semejante a la presente en el desarrollo embrionario de T. niger. A diferencia de la informada por Goulet y colaboradores (2004) y Sullivan y colaboradores (2009), la proteasa nuclear caracterizada en esta tesis tiene un tamaño molecular mayor y coexiste con el zimógeno también presente en el extracto nuclear. Estos resultados demuestran, por primera vez, la presencia de una variante de Catepsina L de 60 kDa localizada en el núcleo de células HeLa cuya función es desconocida.
Description
Tesis presentada para optar al grado de Magíster en Ciencias, Mención Bioquímica
Keywords
Catepsina L, Células Hela, Proteasas