Tesis Doctorado

Permanent URI for this collection

https://repositorio.udec.cl/handle/11594/185

Browse

Browsing Tesis Doctorado by Subject "ADN"

Now showing 1 - 2 of 2
  • Thumbnail Image
    Item
    Estudio de la regulación transcripcional del Gen RIC-8B durante la diferenciación celular.
    (Universidad de Concepción., 2010) Grandy Morgan, Rodrigo Andrés; Montecino Leonard, Martín Alejandro
    Actualmente, se conocen los mecanismos moleculares que están detrás del control transcripcional de muchos de estos genes. Sin embargo, para Ric-8, un gen que codifica para una proteína que ha sido ampliamente descrita por su rol en el control de la división celular asimétrica y simétrica en eucariontes, se desconocen tales mecanismos. De acuerdo con esto, el objetivo de esta tesis, es determinar los mecanismos moleculares de regulación transcripcional del gen Ric-8B durante la diferenciación celular. En ese contexto, mostraremos que la expresión de Ric-8B, un homólogo de Ric-8, es reprimida gradualmente durante la diferenciación celular osteoblástica en ratón. Además, mediante ensayos de actividad del gen reportero luciferasa, ARNs de interferencia, inmunoprecipitación de cromatina (ChIP) y ensayos de sensibilidad a endonucleasas, entre otras técnicas, demostraremos que la represión de la expresión de este gen durante la diferenciación osteoblástica, es mediada directamente por el factor de transcripción C/EBPβ. Coherentemente con lo anterior y con el hecho que el complejo remodelador de cromatina dependiente de ATP, SWI/SNF puede interactuar físicamente con C/EBPβ, y considerando además, que existen reportes que señalan que las dos subunidades catalíticas del complejo SWI/SNF (Brg1 y Brm), pueden modular negativamente la expresión génica, demostraremos que SWI/SNF reprime directamente la expresión de Ric-8B en células osteoblásticas diferenciadas, en forma dependiente de su actividad ATPasa. De acuerdo con esto, mostraremos también, que la represión de Ric-8B en células osteoblásticas diferenciadas está asociada a un incremento en la densidad nucleosomal y a un remodelamiento de la estructura de la cromatina, pero no a la metilación del ADN, ni a cambios en los niveles totales de acetilación de la Histona H3 en el promotor proximal de Ric-8B.
  • Thumbnail Image
    Item
    Participación de los transportadores de monocarboxilatos hipotalámicos en la regulación de la ingesta alimenticia.
    (Universidad de Concepción., 2016) Elizondo Vega, Roberto Javier; García Robles, María de los Ángeles
    La detección de glucosa en el hipotálamo es un proceso crucial que regula el comportamiento alimenticio, la cual a través de la detección de cambios en la concentración de glucosa por células cerebrales, produce en respuesta la liberación de neuropéptidos orexígenos y anorexígenos. Las neuronas del núcleo arqueado (NA) han sido clásicamente identificadas como las células responsables del mecanismo glucosensor hipotalámico, a través de mecanismos directos de detección; sin embargo, estudios recientes han demostrado la existencia de un acoplamiento metabólico entre tanicitos y neuronas del NA, el cual sería mediado por lactato, mecanismo que podría contribuir a este proceso. Los transportadores de monocarboxilatos 1 (MCT1) y 4 (MCT4), son las principales transportadores de monocarboxilatos expresadas por tanicitos, los cuales facilitan la liberación de lactato a neuronas del NA, mientras que MCT2 es el principal transportador expresado por neuronas hipotalámicas. Nosotros hipotetizamos que los tanicitos interaccionan con las neuronas hipotalámicas a través de monocarboxilatos para regular la ingesta alimenticia, por lo tanto la inhibición de MCT1 y/o MCT4 podría alterar el acoplamiento metabólico entre tanicitos y neuronas del NA. Para evaluar esto, inhibimos la expresión de MCT1 y/o MCT4 a través de la transducción de shARN mediado por partículas adenovirales inyectadas en el tercer ventrículo, permitiendo la transducción de ependimocitos y tanicitos. Utilizando estos animales knockdown para MCT1 y/o MCT4, evaluamos la expresión de neuropéptidos en respuesta a la inyección intracerebroventricular de glucosa, como el comportamiento alimenticio luego de un periodo de ayuno. Nuestros resultados muestran una pérdida de la regulación de la expresión de neuropéptidos orexígenos mediada por glucosa, y una expresión anormal de neuropéptidos anorexígenos en respuesta al ayuno. Esto se ve acompañado por un incremento en la ingesta alimenticia y un incremento en el peso corporal en animales knockdown para MCT1, y una disminución de la saciedad en animales knockdown para MCT4. Por otro lado, la doble inhibición de MCT1 y MCT4, es capaz de producir un incremento en la ingesta alimenticia, un incremento del peso corporal y una disminución de la saciedad. En conjunto, estos resultados indican que la expresión de MCT1 y MCT4 posee un relevante rol en la regulación del comportamiento alimenticio.
Síguenos en...